【摘 要】
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目的:疟疾是通过按蚊咬吸或外源注入带有疟原虫的血液从而感染疟原虫所导致的疾病。2018年全球疟疾报告中指出,仅2017年世界范围内有2.19亿病人,而前一年疟疾感染人数为2.17
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目的:疟疾是通过按蚊咬吸或外源注入带有疟原虫的血液从而感染疟原虫所导致的疾病。2018年全球疟疾报告中指出,仅2017年世界范围内有2.19亿病人,而前一年疟疾感染人数为2.17亿。其中,约70%患者来自于11个国家(非洲大陆10个国家,以及印度)。在非洲大陆的10个国家中,疟疾仍旧是5岁以下儿童死亡的主要原因。近些年来,临床上的以青蒿素为基础的联合用药虽然在一定程度上减少了疟疾的死亡人数,使疟疾传播受到一定的限制,但是每年仍旧引起许多新发病例,并且在东南亚一些国家发现了对于以青蒿素为基础的联合用药的耐药性虫株,以及对于杀虫剂具有抵抗性的按蚊,这些现象都使得研发有效的疟疾疫苗成为了抗疟过程的重要目标。传播阻断疫苗实施意义在于能够阻断疟原虫的有性传播阶段,尽管传播阻断疫苗在疟疾控制方面起到至关重要的作用,但由于传播阻断疫苗的局限性,且未能够发现更好的抗疟手段。从而,找寻其他消灭疟疾的有效途径变得至关重要。蛋白磷酸酶可以分为Ser/Thr蛋白磷酸酶(PSPase),磷酸化的Tyr蛋白磷酸酶(PTPase)和磷酸化的双特异性蛋白磷酸酶。其中Ser/Thr蛋白磷酸酶包括PPP和PPM。另外,Ser/Thr蛋白磷酸酶可以分为PP1和PP2两类,而这两类同属于PPP家族,PP2可以分为PP2A和PP2B。蛋白磷酸酶6(PPP6)属于PP2A家族,在调控细胞功能中发挥重要作用。所以对于疟原虫蛋白磷酸酶(protein phosphatase,PP)的研究对于消灭疟疾有非常好的前景。研究方法:生物信息学分析其基本功能;原核表达重组蛋白;免疫实验动物收集抗血清;ELISA方法检测抗血清的效价;检测PbPPP6表达阶段;体外传播阻断实验;获取敲除虫株,分析基因功能。结果:1、预测了PbPPP6的基本生物学功能。2、成功获得免疫血清,且具有良好的效价。3、Western blot及IFA检测说明该基因在疟原虫全阶段均有表达。4、体外实验证明免疫血清抑制出丝,减少动合子形成。5、与野生型相比,敲除虫株降低红内期感染率,抑制出丝、动合子形成及卵囊的形成。结论:1、PbPPP6在疟原虫全阶段均有表达。2、免疫血清有良好的传播阻断效应3、PbPPP6对疟原虫的红内期和有性阶段均有影响。
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