论文部分内容阅读
肿瘤特异性增殖腺病毒又称溶瘤腺病毒能特异的在肿瘤细胞中复制、增殖,从而杀死肿瘤细胞,而对正常细胞毒性小,是一种理想的抗肿瘤药物。为了进一步提高溶瘤腺病毒的抗肿瘤效果,我们以病毒为载体,携带各种治疗基因,将基因治疗与病毒治疗结合起来,称为肿瘤的靶向基因病毒治疗。肝癌细胞对TRAIL存有抗性,原因有两点。第一是因为肝癌细胞中高表达XIAP蛋白,抑制了细胞的凋亡。我们以溶瘤腺病毒ZD55为载体分别表达TRAIL基因及Smac基因,共同感染肝癌细胞,能显著降低XIAP的表达并且引起肿瘤细胞的大量凋亡,与一种病毒的单独治疗相比,ZD55-TRAIL与ZD55-Smac两种病毒的联合治疗能全部消灭动物模型肿瘤,这种以溶瘤腺病毒为载体,利用Smac基因抑制IAP从而提高细胞对TRAIL的敏感性的方法有效地治疗了肝癌,也为其它IAP高表达的肿瘤提供了治疗希望。肝癌细胞对TRAIL存有抗性的另外一个原因是TRAIL在引起细胞凋亡的同时激活了NF-κB介导的细胞存活通路。非复制型腺病毒携带CYLD基因(Ad/hTERT-CYLD)通过去除TRAF2泛素化,阻止IKK复合物对IκBα的降解而阻止NF-κB的激活。Ad/hTERT-CYLD与ZD55-TRAIL的联合使用能引起肝癌细胞的迅速凋亡并且能有效地消除BEL7404移植瘤,为肝癌以及NF-κB活性升高的肿瘤提供了新的治疗方法。Apollon是膜相关的凋亡抑制蛋白,是IAP家族的成员之一,Apollon可以阻止细胞凋亡,在部分肿瘤细胞中其表达上调。在这一部分的研究中,我们以肿瘤特异性增殖腺病毒ZD55为载体,表达靶向Apollon基因的短发夹RNA(short hairpin RNA, shRNA)。结果表明,ZD55-siApollon可以特异性地下调肿瘤细胞Hela、HT-1080以及MCF-7中的Apollon表达,这一病毒在体外以及裸鼠体内均可以抑制肿瘤细胞的生长;细胞周期分析、DAPI染色和western分析表明ZD55-siApollon能引起肿瘤细胞凋亡;在HT-1080荷瘤裸鼠瘤内注射ZD55-siApollon能明显地抑制肿瘤生长;ZD55-siApollon与化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)结合后有协同效应,能将肿瘤完全消灭。总结而言,运用肿瘤特异性增殖腺病毒介导shRNA剔除Apollon为肿瘤治疗提供了一种很有希望的策略。