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抗磷脂抗体（antiphospholipid antibodies,aPL）/抗 β2 糖蛋白 I抗体（anti-β2GPⅠ）复合物在抗磷脂综合征（antiphospholipid syndrome,APS）发病机制中发挥重要作用,能够诱导促血栓、促炎症相关因子的表达,最终导致血栓形成。课题组前期研究表明,Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）和膜联蛋白 A2（Annexin A2,ANX2）协同介导人单核细胞细胞株THP-1中anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导的组织因子（Tissue factor,TF）的表达。本论文旨在前期研究的基础上,通过THP-1细胞在体外条件下验证anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物在血栓形成中的作用及其机制;并利用纯合TLR4功能正常（C3H/HeN）及TLR4功能缺陷（C3H/HeJ）小鼠建立实验性APS（EAPS）小鼠模型,深入分析TLR4在aPL/anti-β2GPⅠ诱发小鼠动静脉血栓形成中的作用,为APS的免疫干预及血栓形成的防治提供实验依据。TLR4和ANX2协同介导THP-1细胞中anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导的TF表达。本试验研究了 TLR4及其接头分子髓样分化蛋白2（myeloid differentiation protein 2,MD-2）和髓样分化因子 88（myeloid differentiation factor 88,MyD88）以及核因子 kappa B（nucelear factorκ B,NF-κB）在anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ诱导的THP-1细胞活化和促炎分子表达的影响。结果发现,anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物处理THP-1细胞能够促进白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达;而预先加入TLR4抑制剂TAK-242（5 μM）或NF-κB抑制剂PDTC（20 μM）能够使相关促炎因子表达不再升高。结果提示,TLR4/MD-2/MYD88 和 NF-κB 信号通路参与了anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导的IL-6,IL-8和TNF-α的表达,这可能与抗磷脂综合症的病理机制有关。在体外实验的基础上,本研究分析了 anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ引起体外培养C3H/HeN和C3H/HeJ小鼠来源腹腔巨噬细胞TF mRNA和蛋白表达的差异。结果发现,在C3H/HeN小鼠来源腹腔巨噬细胞组中,anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ 复合物和脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）刺激使TF、TNF-α白细胞介素-1β（ILlβ）和IL6基因和蛋白水平显著升高（p<0.05）。在FeC13诱导EAPS小鼠动静脉血栓形成的实验中,与C3H/HeJ小鼠组相比,C3H/HeN小鼠颈动脉的血栓体积更大,股静脉有更多的红细胞堆积,提示TLR4在anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物引起的前血栓状态（pre-thrombosis state）和炎症状态中发挥重要作用。最后,本试验中针对EAPS模型小鼠的研究发现,C3H/HeN小鼠的巨噬细胞和内皮细胞TF蛋白表达显著增多,TF活性明显升高,巨噬细胞中TNF-α、IL1β和IL6蛋白表达显著升高,与C3H/HeJ组存在显著差异（p<0.05）。腹腔注射 anti-β2GPⅠ 或 IgG-APS 后,C3H/HeN小鼠胸主动脉黏附分子,如血管细胞黏附分子（vascular cell adhesion molecule 1,VC AM-1）、细胞间黏附分子（intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1）和 E 选择素（E-selectin）mRNA 和蛋白表达均显著升高,且与C3H/HeJ组差异显著（p<0.05）,结果表明TLR4介导anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物参与调控EAPS小鼠胸主动脉黏附分子VCAM-1、ICAM-1和E-selectin表达,提示其在血管内皮细胞的高黏附状态中扮演重要角色,这与APS中的血栓形成有关,为这一并发症的预防及治疗提供了新的研究思路。