背景1型糖尿病(T1DM)是一种自身免疫性疾病,其特征是胰岛素缺乏和高血糖症。目前临床上针对T1DM的主要治疗是使用胰岛素,但并不能控制其严重症状。近年来,免疫干预以及细胞移植对T1DM的疗效逐渐得到认可。间充质干细胞因具有自我更新、多向分化等潜能,同时具有较强的免疫调节能力在临床上备受关注。其中经血源子宫内膜干细胞(Menstrual blood derived endometrial stem cell,MenSCs)凭借其获取来源丰富、增殖活性较强、分离方法无创伤等优势,成为干细胞治疗T1DM的研究热点。目的1.探索不同代次MenSCs的生物学活性,为MenSCs的临床应用提供合适的种子细胞。2.明确MenSCs静脉输入后对T1DM症状的改善效果。方法1.密度梯度离心法分离提取MenSCs,流式细胞术分析MenSCs表面标志物,进行成脂、成骨和成软骨三系分化验证;2.将MenSCs传至P3、P9和P15代,钙黄绿素AM(calcein-AM)染色观察细胞形态;β-半乳糖苷酶染色检测不同培养代次MenSCs的衰老程度;活性氧试剂盒检测MenSCs活性氧含量;3.建立小鼠脾淋巴细胞(PBMCs)与P3、P9和P15代MenSCs共培养体系,MTT法检测增殖活性;PI染色检测PBMCs的凋亡与细胞周期;流式细胞术检测MenSCs对PBMCs CD3~+和CD19~+亚群影响;4.通过低剂量多次腹腔链脲佐菌素(STZ)注射,建立T1DM小鼠模型,MenSCs和脐带间充质干细胞(UcMSCs)静脉输入后,监测小鼠空腹血糖、体重和进食量变化;5.MenSCs和UcMSCs移植64天后,收集小鼠血液样本进行生化检测,利用蛋白质芯片检测小鼠外周血细胞因子。称取肾、肝、脾脏重量计算脏器指数,对胰腺、肾脏、肝脏、脾脏组织进行HE染色。结果1.分离提取的MenSCs成典型的成纤维样结构,阳性表达CD73、CD90、CD105和HLA-ABC,阴性表达HLA-DR,在相关诱导培养基存在下能够向成脂、成骨及成软骨样细胞分化;随着培养代次的增加MenSCs细胞面积显著增大,在培养至P15MenSCs开始出现大量丝状伪足;衰老程度及活性氧的含量随培养代次的增加而显著升高;2.在MenSCs与PBMCs共培养体系中,MenSCs显著增加了小鼠脾淋巴细胞的活性,降低淋巴细胞死亡率;且随培养代次的增加,MenSCs对促进淋巴细胞存活、降低死亡的能力显著降低;进一步细胞周期检测发现,MenSCs无刺激淋巴细胞增殖分裂活性,但可显著降低淋巴细胞死亡及碎片化,且培养代次的增加可显著降低MenSCs维持淋巴细胞存活的能力;此外,不同培养代次MenSCs在体外均对小鼠脾淋巴细胞中CD3+和CD19+细胞亚群的百分比无显著性影响;3.MenSCs和UcMSCs移植后,均能显著改善小鼠随机血糖,且二者趋势一致;进一步胰腺切片结果亦表明干细胞处理组小鼠胰腺中胰岛数量和面积显著高于对照组;MenSCs和UcMSCs移植后模型鼠体重和进食量均显著增加,且两者无显著差异;蛋白质芯片结果表明干细胞移植后能显著降低小鼠血清TNF-α,IFN-γ提高IL-6和VEGF含量;HE染色及生化指标检测结果也表明干细胞移植后能显著改善实验动物肝肾功能,而对脾脏无明显改善作用。结论1.MenSCs体外随着培养代次增加,其细胞活性显著降低;2.MenSCs能够系统性改善T1DM实验动物相关症状。