本实验为了能够建立一种快速、灵敏度高、特异性强的检测猪瘟病毒的实时荧光定量PCR方法,根据Gen Bank中所公布猪瘟病毒的基因序列,设计一套特异性的引物和探针,采用病毒RNA提取试剂盒提取猪瘟病毒RNA,经常规PCR方法扩增,对PCR产物做琼脂糖凝胶电泳,切胶回收目的片段,克隆至pMD19-T,构建pMD19-T-CSFV,并转化到DH5a感受态细胞中；用质粒提取试剂盒从菌液提质粒DNA,经PCR鉴定及对菌液测序鉴定为阳性质粒,以阳性质粒DNA为模板对引物浓度、探针浓度及退火温度进行优化,选择最佳的引物浓度、探针浓度及退火温度来建立实时荧光定量PCR反应体系和参数,用已建立好的荧光定量PCR方法做猪瘟病毒特异性和敏感性试验,并对临床样品进行检测,结果表明该方法可以将猪瘟病毒、病毒性腹泻黏膜病病毒、羊口疮病毒和羊痘病毒区分,用此荧光定量PCR方法做临床检测得到相对理想的结果,本检测方法的变异系数均低于0.02,表明具有很好的稳定性和重复性。灵敏度可以达到100拷贝的数量级,而且方法稳定。