红松不同部位多糖分离纯化、结构及抗氧化活性研究

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本实验从红松松塔、松皮及松针水提物中获取多糖,通过脱蛋白、脱色素,分别得到红松松塔、松皮及松针多糖,对这三种多糖进行初步的理化性质研究,并进行抗氧化能力分析,得到抗氧化能力较强的活性多糖为松塔多糖。对红松松塔多糖进一步分离纯化得到均一组分多糖PKP-D70-2-a和PKP-D70-2-b。采用仪器法和化学法结合解析PKP-D70-2-a和PKP-D70-2-b化学结构,并对其抗氧化能力进行评价,最后初步探讨其结构与功能之间的关系,使其变废为宝并充分发挥其潜在的价值。采用水提醇沉法分别得到红松松塔、松皮及松针粗多糖,通过三氟乙酸法脱蛋白,纤维素柱脱色素,分别得到三种多糖。采用高效液相法测定其分子量分别为4750kDa、2030kDa、2810kDa、;通过苯酚-硫酸法,间羟基联苯法、考马斯亮蓝法、福林酚法对其化学组分测定,均主要含有多糖和糖醛酸,但三者多糖的蛋白和多酚含量均较小,总量不足4.5%;通过红外光谱分析,三种多糖均具有多糖特征吸收峰;通过完全酸水解得到三种多糖均含有7种多糖,为D-Galactose、D-Glucose、D-Mannose、D-Xylose、L-Arabinose、L-Rhamnose、D-Ribose;通过对三种多糖抗氧化能力研究得到松塔多糖的抗氧化能力较好,其清除羟基自由基、ABTS自由基以及还原力的EC50值分别为6.54、5.06、9.15mg/mL。采用乙醇分级醇沉、脱蛋白、脱色素、DEAE-52和Sephadex G-100柱层析,得到两种均一多糖组分PKP-D70-2-a和PKP-D70-2-b。通过对其化学组分测定得到两种组分中均主要含有多糖和糖醛酸,同时含有的取代基有硫酸基团、磷酸基团、苯甲酰基。同时应用紫外光谱、红外光谱、核磁共振波谱、完全酸水解、部分酸水解、高碘酸氧化-Smith降解、刚果红试验、β-消去反应解析均一组分化学结构。PKP-D70-2-a含有5种单糖、分别为L-Ribose、L-Arabinose、D-Mannose、D-Glucose、D-Galactose,PKP-D70-2-a含有4种单糖,其中不含L-Ribose;PKP-D70-2-a主链和支链上均含有5种单糖,PKP-D70-2-b的主链和支链上均含有4中单糖,并且均主要以1→2或1→2,6或1→4或1→4,6连接;PKP-D70-2-a的支链上总糖含量占55.49%,PKP-D70-2-b占53.80%;二者中的糖蛋白均含有O-糖昔键;PKP-D70-2-a在水溶液中主要呈现自由卷曲构象,PKP-D70-2-b主要呈现螺旋构象;PKP-D70-2-a主要糖苷键构型为3,4)-a-Galp-(1→)、→4)-α-D-GalpA-(1→和4,6)-β-Glcp-(1→),PKP-D70-2-b则为β-D-Glcp-(1→、β-D-Gal link a-D-Gal-6sulfate、→4)-α-D-Glc-(1→、→4)-β-D-GalpA6Me-(→、 α-D-Glc(1→)。通过抗氧化能力评价得到,PKP-D70-2-b的清除自由基能力强于PKP-D70-2-a,但还原力却弱于PKP-D70-2-a。通过初步构效关系研究,得出相对分子质量、取代基类型、单糖组成及构型、螺旋结是影响PKP-D70-2-a和PKP-D70-2-b抗氧化能力的主要因素。
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