转录因子TaNF-YC1在小麦-条锈菌互作中的功能研究

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小麦是全球分布范围最广、种植面积最大、商品率最高的粮食作物之一,超过25亿人以小麦为主粮,其安全、稳定、优质生产对世界粮食安全至关重要。然而生产过程中的小麦常常受到条锈病的威胁,小麦条锈病的严重爆发可以造成产量损失50%~80%。种植抗病品种是目前最为绿色有效的病害防控措施,但是品种抗性会因条锈菌致病小种的毒性变异而被克服,导致病害再次爆发。因此,挖掘新的小麦抗条锈病基因,研究其分子调控机理,创制新型抗病材料,将有助于抗病品种的选育,对我国小麦条锈病的长期有效防控意义重大。转录因子(Transcription factor,TF)是一类可以调控其它基因表达的蛋白,其通过在特定条件特异性结合下游基因的启动子顺式作用元件,调控下游基因表达,参与调控植物的生长发育及逆境胁迫响应。实验室前期筛选得到了一个受条锈菌显著诱导表达属于核因子Y(Nuclear Factor-Y,NF-Y)转录因子家族NF-YC亚家族的小麦基因TaNF-YC1,该基因在小麦品种水源11接种条锈菌非亲和小种CYR23后48 h显著诱导上调表达,瞬时沉默TaNF-YC1降低了小麦对条锈菌的抗性。本论文在前期研究的基础上,结合生物信息学、遗传学、分子生物学、生物化学和组织病理学等多学科手段,对TaNF-YC1在小麦响应条锈菌侵染过程中的功能及其激活免疫的机理开展研究,获得的主要结果如下:1.TaNF-YC1正向调控小麦对条锈菌的抗性。为了探究TaNF-YC1在小麦响应条锈菌侵染时的功能,创制并鉴定TaNF-YC1的过表达材料和RNAi材料。发现在接种CYR31后,TaNF-YC1过表达植株的抗病性显著提高,组织学表现为TaNF-YC1过表达植株与对照相比侵染点附近的活性氧积累面积增加,条锈菌菌丝生长发育延缓,菌丝长度和面积都有所减少;在接种CYR23后,TaNF-YC1沉默材料的抗病性显著降低,组织学表现为TaNF-YC1沉默植株叶片活性氧积累面积减少,条锈菌菌丝生长发育更迅速,菌丝长度和面积都有所增加。通过上述实验,证实了TaNF-YC1是一个重要的小麦抗病因子,正向调控小麦对条锈菌的抗性。2.TaNF-YC1是一个NF-YC类转录因子,具有转录激活活性。Blast和序列比对分析发现TaNF-YC1在小麦中有三个同源基因,分别为TaNF-YC1-6A、TaNF-YC1-6B和TaNF-YC1-6D,这三个基因均受到条锈菌诱导表达。蛋白结构域预测发现TaNF-YC1有一个可以结合启动子区域的CCAAT-box元件的CBFD_NFYB_HMF结构域,农杆菌侵染烟草实验明确了TaNF-YC1定位在细胞质和细胞核。酵母自激活实验证实了TaNF-YC1具有转录激活活性,且活性区域位于氮端和碳端。以上实验证明TaNF-YC1是一个NF-YC类转录因子,具有转录激活活性。3.TaNF-YC1通过激活抗病相关基因表达提高小麦抗病性。通过Ch IP-Seq测序分析了在条锈菌侵染后TaNF-YC1激活的小麦抗病网络,KEGG富集分析发现,TaNF-YC1调控网络中包含了MAPK信号通路和钙信号通路等典型的植物抗病通路;对其中高度富集的抗病相关基因Ta RPM1、Ta ACD6进行验证,通过q RT-PCR在TaNF-YC1过表达材料中检测其表达水平,以及在小麦原生质内进行双荧光素酶报告实验证实了TaNF-YC1可以激活并调控Ta RPM1、Ta ACD6的表达。该结果表明TaNF-YC1通过激活Ta RPM1、Ta ACD6等抗病相关基因的表达,来激活小麦抗病免疫网络,提高条锈病抗性。综上所述,本论文初步揭示了TaNF-YC1是一个正向调控小麦对条锈菌的抗性的NF-YC类转录因子,定位于细胞质和细胞核,具有转录激活活性。在小麦响应条锈菌侵染过程中,TaNF-YC1调控了抗病相关基因Ta RPM1、Ta ACD6的表达,为小麦条锈病抗性改良提供了靶标,同时为抗病育种提供新的抗病资源。
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