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邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)作为最常见的增塑剂,是一种环境激素,具有较强的稳定性,难降解的特性。随着塑料制品的大量生产和使用,在造成环境“白色污染”的同时,DEHP也不断进入水域环境。包括DEHP污染物在内的大量的有机污染物通过各种途径进入海洋环境,并最终迁移至海洋生物体内或富集于底质和悬浮物中,对海洋环境和海洋生物造成极大的危害。但对于DEHP为代表的环境激素污染物分子标记物的研究却明显滞后,只见零星的研究报道,极大地制约了DEHP快速检测预警体系的建立。本文选择菲律宾蛤仔(Venerupis philippinarum)全组织和斧足,依据海洋环境中DEHP含量测定数据,室内模拟设定了0.4mg/L和4mg/L两个不同的暴露剂量,调查了DEHP在体内的时序积累变化,同时从基因和蛋白两个层次上发掘DEHP指示的分子标记物,以期获得污染物快速预警分子标记物,研究成果如下:(1)GC-MS联用技术测定菲律宾蛤仔富集DEHP污染物:无论是高浓度组还是低浓度组的菲律宾蛤仔全组织和斧足中DEHP的浓度的变化模式都是先增加后减少。在0.4mg/LDEHP暴露组,全组织中24h和96h检测到的DEHP浓度分别为0.166μg/g和0.071μg/g,斧足中则分别为为0.203μg/g和0.104μg/g;高浓度胁迫组,全组织中的响应检测值为2.300μg/g和1.047μg/g,斧足中为1.689μg/g和1.172μg/g。(2)菲律宾蛤仔响应DEHP胁迫的免疫相关分子标记物的发掘:DEHP主要是通过介导活性氧(ROS)和一氧化氮(NO)的产生来调控高等动物的免疫反应。在本文中,通过定量PCR技术评估了短期急性DEHP胁迫下菲律宾蛤仔10个免疫相关基因的时序表达变化模式。结果表明:检测的10个基因在不同的时间点与对照组均呈现差异表达,其中谷氨酰胺合成酶(GS),KappaB抑制剂的(IK),转录因子激活蛋白-1(AP-1),亲环素A-1(CypA-1),热休克蛋白90(HSP90)和超氧化物歧化酶(SOD)6个基因呈现剂量依赖性的表达模式;大防御素(BD),谷胱甘肽S-转移酶(GST)和硫氧还蛋白过氧化物酶(TP)的表达则与DEHP浓度呈现负相性;溶菌酶(LYZ)则在两个DEHP剂量中表现出两种不同的表达趋势。(3)菲律宾蛤仔响应DEHP胁迫的血细胞蛋白标记物的识别:为在蛋白层面上获得指示DEHP污染的分子标记物,我们分析了上述两种DEHP浓度胁迫的菲律宾蛤仔血细胞全蛋白表达谱。对其中显著差异的27个蛋白点(差异倍数在1.5以上)进行鉴定和表征,其中涉及到糖酵解途径的6种蛋白和TCA循环中的5种蛋白均呈现上调表达模式。利用过qPCR测定了其中的苹果酸脱氢酶(MDH)的mRNA表达水平。与乙醇对照组相比,MDH基因mRNA的转录水平均升高。(4)菲律宾蛤仔响应DEHP胁迫的斧足蛋白标记物的识别:在暴露实验过程中,我们观察到实验组的蛤仔运动能力明显降低,结合血细胞蛋白表达谱分析结果,我们推测DEHP可能通过调控机体的能量代谢抑制运动能力。因此,我们选取蛤仔运动组织斧足,检测了其在上述DEHP浓度胁迫下的蛋白质表达差异。我们对显著差异的28个蛋白点进行鉴定和表征,其中涉及到糖酵解途径的6种酶被抑制,而参与TCA循环中的两种组分则被诱导表达。对其中苹果酸脱氢酶(MDH)的酶活活性及mRNA表达水平测定揭示了DEHP胁迫可明显上调MDH活性及mRNA的转录水平。