【摘 要】
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目的:胎盘是哺乳动物妊娠期维持胎儿正常生长发育的一个临时性的器官,是胎儿与母体进行营养和气体交换的唯一渠道。小鼠动物模型已被广泛用于胎盘早期发育的研究,尽管小鼠与人在胎盘上具有很大的相似性,比如,两者均是血绒毛膜胎盘。但是,两者之间同时存在着巨大的差异性,包括滋养层细胞的类型等。在哺乳动物的进化过程中,出现了胎盘差异性表达基因。当某些人胎盘差异性基因发生异常表达时,将会导致妊娠并发症。这说明,在人
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目的:胎盘是哺乳动物妊娠期维持胎儿正常生长发育的一个临时性的器官,是胎儿与母体进行营养和气体交换的唯一渠道。小鼠动物模型已被广泛用于胎盘早期发育的研究,尽管小鼠与人在胎盘上具有很大的相似性,比如,两者均是血绒毛膜胎盘。但是,两者之间同时存在着巨大的差异性,包括滋养层细胞的类型等。在哺乳动物的进化过程中,出现了胎盘差异性表达基因。当某些人胎盘差异性基因发生异常表达时,将会导致妊娠并发症。这说明,在人和鼠胎盘发育过程中,必然存在着特殊的胎盘差异表达基因,并在其的进化及其发育过程中发挥着必不可少的作用。IL-32作为我们前期鉴定的胎盘种属差异表达基因,在人绒毛滋养层细胞中高表达,而在小鼠胎盘中不表达。细胞因子和miRNA之间的相互调控在炎症和肿瘤的发生发展中起着关键性的作用,miR-205可以作为IL-32的下游靶标在多种炎症中发挥作用。本研究拟利用细胞及分子生物学方法研究IL-32对滋养层细胞功能的影响及其分子机制进行研究,以及研究IL-32是否通过miR-205在早期胎盘发育过程中发挥着作用,这将为人胎盘功能及机制的研究提供新的实验依据。方法:利用CCK8实验检测IL-32和miR-205对滋养细胞增殖的影响;利用划痕实验检测IL-32和miR-205对滋养细胞的迁移的影响;利用transwell实验检测IL-32和miR-205对滋养细胞侵袭的影响;利用HUVEC细胞检测IL-32和miR-205对成管的影响。利用qRT-PCR检测IL-32、MMP2和MMP9在mRNA水平上的变化;利用Western Blot检测IL-32、NF-κB、MMP2和MMP9在蛋白水平上的变化;通过对妊娠疾病胎盘样本的研究,探索IL-32与妊娠疾病的相关性。结果:CCK8实验结果显示,rIL-32α和rIL-32γ,可以显著抑制HTR-8细胞的增殖;敲低细胞内IL-32后,细胞的增殖被显著增强;过表达细胞内miR-205后,细胞的增殖被显著增强。划痕实验结果表明,rIL-32α和rIL-32γ,可以显著促进HTR-8细胞的迁移;敲低细胞内IL-32后,细胞的迁移被显著抑制;过表达细胞内miR-205后,细胞的迁移被显著抑制。Transwell实验结果表明,rIL-32α和rIL-32γ,可以显著促进HTR-8细胞的侵袭;敲低细胞内IL-32后,细胞的侵袭被显著抑制;过表达细胞内miR-205后,细胞的侵袭被显著增强。成管实验结果显示,rIL-32α对HUVEC细胞的成管没有影响,而rIL-32γ可以显著促进细胞的成管;敲低细胞内IL-32后,显著抑制了细胞成管。在HUVEC细胞内过表达miR-205后,显著促进了细胞的成管。qRT-PCR和Western Blot结果显示IL-32可以通过miR-205激活了NF-κB途径,进而促进MMMP2和MMP9的表达,从而促进了滋养细胞的侵袭;通过对妊娠糖尿病和妊娠高血压胎盘样本的分析,结果显示,IL-32在妊娠高血压的胎盘中显著下调。结论:1.IL-32能够促进滋养细胞的迁移和侵袭,抑制其增殖;并且促进血管生成。2.IL-32可以通过调控miR-205的合成,进而激活NF-κB通路,从而促进滋养细胞的侵袭。3.IL-32可能参与到妊娠高血压的发生发展。
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