论文部分内容阅读
目的:探究肾虚卵巢储备功能减退(DOR)患者与正常卵巢储备(NOR)女性之间microRNA(miRNA)表达差异,应用补肾中药二至天癸颗粒干预,从微观角度探究补肾中药对肾虚卵巢储备功能减退的影响,寻找与卵巢储备功能减退相关的肾虚标志物,为进一步探究肾虚卵巢储备功能减退机制提供研究依据。
方法:实验一:筛选出符合实验标准的肾虚DOR患者及单纯男方因素不孕NOR女性,通过miRNA测序技术筛选二者差异表达的miRNA。实验二:治疗组以二至天癸颗粒+IVF干预患者,对照组以中药安慰剂+IVF干预患者,统计两组患者治疗前后肾虚证中医证候积分变化、促性腺激素(Gn)使用天数、Gn用量、HCG注射日雌二醇(E2)和孕酮(P)、获卵数、2PN数、成胚数、优质胚胎数及优质胚胎率,采用实时荧光定量技术(qPCR)测定卵巢颗粒细胞中实验一所筛选出的特异性miRNA表达情况。
结果:实验一:与NOR女性相比,DOR患者卵巢颗粒细胞中miR-221-3p、miR-146b-5p、miR-378a-3p、miR-143-5p、miR-222-5p、miR-221-5p等45个miRNA表达下调(P<0.05),miR-6881-3p、miR-4787-3p、miR-4745-5p、miR-6513-3p、miR-3179等25种miRNA表达上调(P<0.05)。主要相关通路为PI3K/Akt和MAPK信号通路。实验二:1.治疗组治疗后肾虚证中医证候积分较治疗前显著下降(P<0.001),对照组治疗前后肾虚证中医证候积分未见显著差异(P>0.05)。与对照组相比,治疗组治疗前后肾虚证中医证候积分差异更显著(P<0.001)。2.与对照组相比,治疗组患者Gn用量显著减少,HCG日E2水平相对较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,治疗组获卵数、优质胚数、优质胚胎率显著升高(P<0.05),但两组患者间2PN数及成胚数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3.与对照组相比,治疗组卵巢颗粒细胞中miR-146b-5p、miR-378a-3p、miR-143-5p、miR-222-5p、miR-221-5p、miR-221-3p表达上调,miR-6881-3p、miR-4787-3p的表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。
结论:1.肾虚DOR患者与NOR女性相比,卵巢颗粒细胞中miR-146b-5p、miR-378a-3p、miR-143-5p、miR-222-5p、miR-221-5p、miR-221-3p、miR-6881-3p、miR-4787-3p的表达有显著差异,这种差异可能与肾虚证候相关。2.二至天癸颗粒可以改善肾虚DOR患者的肾虚证候,提高获卵数、优质胚胎数及优质胚胎率,影响实验一所得8个特异性miRNA的表达,表明二至天癸颗粒可能是通过调节这8个miRNA表达来改善患者肾虚证候,进而提高患者妊娠的可能性。3.miR-146b-5p、miR-378a-3p、miR-143-5p、miR-222-5p、miR-221-5p、miR-221-3p、miR-6881-3p、miR-4787-3p可能是DOR的肾虚标志物,为进一步研究肾虚DOR的机制提供理论依据。
方法:实验一:筛选出符合实验标准的肾虚DOR患者及单纯男方因素不孕NOR女性,通过miRNA测序技术筛选二者差异表达的miRNA。实验二:治疗组以二至天癸颗粒+IVF干预患者,对照组以中药安慰剂+IVF干预患者,统计两组患者治疗前后肾虚证中医证候积分变化、促性腺激素(Gn)使用天数、Gn用量、HCG注射日雌二醇(E2)和孕酮(P)、获卵数、2PN数、成胚数、优质胚胎数及优质胚胎率,采用实时荧光定量技术(qPCR)测定卵巢颗粒细胞中实验一所筛选出的特异性miRNA表达情况。
结果:实验一:与NOR女性相比,DOR患者卵巢颗粒细胞中miR-221-3p、miR-146b-5p、miR-378a-3p、miR-143-5p、miR-222-5p、miR-221-5p等45个miRNA表达下调(P<0.05),miR-6881-3p、miR-4787-3p、miR-4745-5p、miR-6513-3p、miR-3179等25种miRNA表达上调(P<0.05)。主要相关通路为PI3K/Akt和MAPK信号通路。实验二:1.治疗组治疗后肾虚证中医证候积分较治疗前显著下降(P<0.001),对照组治疗前后肾虚证中医证候积分未见显著差异(P>0.05)。与对照组相比,治疗组治疗前后肾虚证中医证候积分差异更显著(P<0.001)。2.与对照组相比,治疗组患者Gn用量显著减少,HCG日E2水平相对较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,治疗组获卵数、优质胚数、优质胚胎率显著升高(P<0.05),但两组患者间2PN数及成胚数比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3.与对照组相比,治疗组卵巢颗粒细胞中miR-146b-5p、miR-378a-3p、miR-143-5p、miR-222-5p、miR-221-5p、miR-221-3p表达上调,miR-6881-3p、miR-4787-3p的表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。
结论:1.肾虚DOR患者与NOR女性相比,卵巢颗粒细胞中miR-146b-5p、miR-378a-3p、miR-143-5p、miR-222-5p、miR-221-5p、miR-221-3p、miR-6881-3p、miR-4787-3p的表达有显著差异,这种差异可能与肾虚证候相关。2.二至天癸颗粒可以改善肾虚DOR患者的肾虚证候,提高获卵数、优质胚胎数及优质胚胎率,影响实验一所得8个特异性miRNA的表达,表明二至天癸颗粒可能是通过调节这8个miRNA表达来改善患者肾虚证候,进而提高患者妊娠的可能性。3.miR-146b-5p、miR-378a-3p、miR-143-5p、miR-222-5p、miR-221-5p、miR-221-3p、miR-6881-3p、miR-4787-3p可能是DOR的肾虚标志物,为进一步研究肾虚DOR的机制提供理论依据。