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目的:观察缓解复发型EAE(Experimental autoimmuneencephalomyelitis)大鼠长期病程中脊髓组织β-APP(β-amyloid precursorprotein)和IL-17(Interleukin-17)表达的相关性,探讨抗氧化剂α-硫辛酸(alpha-lipoic acid,LA)对大鼠多发性硬化(Multiple sclerosis,MS)是否具有保护作用,为进一步研究中枢神经系统(Central nervous systemCNS)脱髓鞘疾病的机制及MS的防治提供实验依据。
方法:取豚鼠脊髓全长,去除脊膜并称重,按脊髓重量与冰盐水体积为1:10比例制成豚鼠脊髓匀浆(GPSCH),再与等量含6 mg/mL卡介苗的完全福氏佐剂(CFA)充分混合,冰上抽打制成油包水乳剂,为完全免疫抗原。按0.5 mL/只分别于大鼠四肢足垫及背部皮下注射抗原匀浆,建立EAE动物模型。将30只大鼠分为对照组(NC组),EAE7天组(EAE-7d组)、EAE半年组(EAE-6M组)、硫辛酸急性期组(LA-7d组)和硫辛酸半年组(LA-6M组)。利用HE染色光镜观察病理学改变,通过免疫细胞化学染色观察β-APP和IL-17的表达变化。
结果:1.HE染色光镜观察:
正常对照组大鼠脊髓组织内细胞形态正常,未见炎性细胞浸润和髓鞘稀疏,而EAE-7d组大鼠脊髓组织内可见到少量单核细胞和淋巴细胞样浸润,血管周围炎性浸润明显,多数血管周围的浸润呈“袖套样”改变,神经元髓鞘稀疏,LA-7d组大鼠的镜下炎性细胞浸润比EAE-7d组大鼠明显减轻,髓鞘结构比EAE-7d组大鼠明显好转,此外,EAE-6M组大鼠仍可见少量炎性细胞浸润、部分髓鞘稀疏,LA-6M组的镜下炎性细胞浸润比EAE-6M组大鼠明显减轻,髓鞘结构比EAE-6M组好转,但仍未达到正常对照组水平。
2.免疫细胞化学染色结果
EAE-7d组大鼠β-APP和IL-17蛋白的表达比正常对照组分别增加87%(P<0.01)和118%(P<0.01);EAE-6M组大鼠β-APP和IL-17蛋白的表达比正常对照组分别增加65%(P<0.01)和100%(P<0.01)。α-硫辛酸处理后急性期组和半年组β-APP和IL-17蛋白的表达明显降低,表现为LA-7d组大鼠β-APP和IL-17蛋白的表达比EAE-7d组分别降低29%(P<0.01)和33%(P<0.01);LA-6M组大鼠β-APP和IL-17蛋白的表达比EAE-6M组分别降低24%(P<0.01)和22%(P<0.01),但两处理组大鼠β-APP和IL-17蛋白的表达均没有恢复到正常组水平。
结论:1.缓解复发型EAE大鼠长期病程中脊髓组织β-APP和IL-17表达明显增高;2.α-硫辛酸可能通过调节IL-17表达而达到减轻EAE大鼠的脊髓腰骶膨大处运动神经元损伤,改善脱髓鞘症状和减少炎性细胞浸润。为MS的治疗提供新思路和理论依据。