缓解复发型EAE大鼠长病程中脊髓组织的病理改变及硫辛酸对其保护作用的实验研究

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目的:观察缓解复发型EAE(Experimental autoimmuneencephalomyelitis)大鼠长期病程中脊髓组织β-APP(β-amyloid precursorprotein)和IL-17(Interleukin-17)表达的相关性,探讨抗氧化剂α-硫辛酸(alpha-lipoic acid,LA)对大鼠多发性硬化(Multiple sclerosis,MS)是否具有保护作用,为进一步研究中枢神经系统(Central nervous systemCNS)脱髓鞘疾病的机制及MS的防治提供实验依据。   方法:取豚鼠脊髓全长,去除脊膜并称重,按脊髓重量与冰盐水体积为1:10比例制成豚鼠脊髓匀浆(GPSCH),再与等量含6 mg/mL卡介苗的完全福氏佐剂(CFA)充分混合,冰上抽打制成油包水乳剂,为完全免疫抗原。按0.5 mL/只分别于大鼠四肢足垫及背部皮下注射抗原匀浆,建立EAE动物模型。将30只大鼠分为对照组(NC组),EAE7天组(EAE-7d组)、EAE半年组(EAE-6M组)、硫辛酸急性期组(LA-7d组)和硫辛酸半年组(LA-6M组)。利用HE染色光镜观察病理学改变,通过免疫细胞化学染色观察β-APP和IL-17的表达变化。   结果:1.HE染色光镜观察:   正常对照组大鼠脊髓组织内细胞形态正常,未见炎性细胞浸润和髓鞘稀疏,而EAE-7d组大鼠脊髓组织内可见到少量单核细胞和淋巴细胞样浸润,血管周围炎性浸润明显,多数血管周围的浸润呈“袖套样”改变,神经元髓鞘稀疏,LA-7d组大鼠的镜下炎性细胞浸润比EAE-7d组大鼠明显减轻,髓鞘结构比EAE-7d组大鼠明显好转,此外,EAE-6M组大鼠仍可见少量炎性细胞浸润、部分髓鞘稀疏,LA-6M组的镜下炎性细胞浸润比EAE-6M组大鼠明显减轻,髓鞘结构比EAE-6M组好转,但仍未达到正常对照组水平。   2.免疫细胞化学染色结果   EAE-7d组大鼠β-APP和IL-17蛋白的表达比正常对照组分别增加87%(P<0.01)和118%(P<0.01);EAE-6M组大鼠β-APP和IL-17蛋白的表达比正常对照组分别增加65%(P<0.01)和100%(P<0.01)。α-硫辛酸处理后急性期组和半年组β-APP和IL-17蛋白的表达明显降低,表现为LA-7d组大鼠β-APP和IL-17蛋白的表达比EAE-7d组分别降低29%(P<0.01)和33%(P<0.01);LA-6M组大鼠β-APP和IL-17蛋白的表达比EAE-6M组分别降低24%(P<0.01)和22%(P<0.01),但两处理组大鼠β-APP和IL-17蛋白的表达均没有恢复到正常组水平。   结论:1.缓解复发型EAE大鼠长期病程中脊髓组织β-APP和IL-17表达明显增高;2.α-硫辛酸可能通过调节IL-17表达而达到减轻EAE大鼠的脊髓腰骶膨大处运动神经元损伤,改善脱髓鞘症状和减少炎性细胞浸润。为MS的治疗提供新思路和理论依据。
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