【摘 要】
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该实验采用人工合成的人成骨生长肽基因与质粒pTYB重组,转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),构建重组人成骨生长肽基因工程菌pTYBrh OGP.重组菌经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(I PTG)
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该实验采用人工合成的人成骨生长肽基因与质粒pTYB<,2>重组,转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),构建重组人成骨生长肽基因工程菌pTYB<,2>rh OGP.重组菌经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(I PTG)诱导,融合蛋白在E.coli中得到表达.表达量占菌体总蛋白的25﹪以上.菌体经超声破碎,一步亲和层析纯化得到完整的重组人成骨生长肽(rhOGP).经反相高效液相色谱(HPLC)测其纯度超过9 7﹪.对表达产物rhOGP的活性测定进行了三方面的实验:体外实验,采用MTT分析方法检测rhOGP对成纤维细胞(NIH3T3)增殖的作用.体内实验,进行了兔同种异体骨移植成活及去卵巢大鼠骨质疏松症等实验.通过在不同时间检验动物模型血清中的碱性磷酸酶、骨钙素、酸性磷酸酶、骨密度水平及移植骨愈合端病理切片观察rhOGP对移植骨愈合及骨质疏松症的治疗的影响.实验结果表明:重组人成骨生长肽对成纤维细胞(NIH3T3)的增殖有促进作用.兔同种异体骨移植的实验HE病理切片结果显示:实验组愈合端的骨小梁形成丰富,成骨细胞数量多,骨密度高,断端裂隙己消失,皮质已连接.而对照组愈合端的骨小梁形成较少,骨密度较低,皮质变薄,断裂端裂隙明显,骨痂量较少.由此说明实验组的骨移植的愈合程度明显高于对照组,rhOGP加速兔移植骨成活.使血清中碱性磷酸酶活性增高,骨钙素增高.去卵巢大鼠骨质疏松症实验结果揭示:rhOGP治疗组碱性磷酸酶、骨钙素和骨密度明显高于骨质疏松对照组(P<0.01),而酸性磷酸酶明显低于骨质疏松对照组P<0.05).结论:rhOGP能刺激成骨细胞的活性,增加骨密度,提高骨量,对去卵巢大鼠所引起的骨质疏松有效.综上所述,重组人成骨生长肽促进成骨,有可能成为治疗骨移植、骨折愈合及骨质疏松症的有效药物.
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