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目的木犀草素(3,4,5,7-四羟基黄酮)是一类广泛存在于多种植物根茎中的黄酮类化合物,具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化以及保护神经等多种生物学活性,并且它可以逆转多种癌细胞的耐药情况。有相关研究证明黄酮类抗氧化药物可通过诱导DNA双链断裂并阻断同源重组修复的启动过程来触发细胞凋亡,这与共济失调毛细血管扩张突变激酶(ATM)激活的减弱,抑制磷酸化共济失调毛细血管扩张突变激酶(pATM)与MRE11-RAD50-NBS1(MRN)复合物的结合有关。但是,木犀草素对胃癌细胞DNA损伤修复影响及机制的研究甚少。本研究选用木犀草素在体外作用于正常胃上皮细胞GES-1、人胃癌细胞AGS、MKN-45、NCI-N87细胞系以及人肾胚HEK-293(DR-GFP)细胞系,初步探讨其抑制肿瘤细胞的机制,为今后临床治疗应用提供实验基础。材料和方法:1.将木犀草素与人胃上皮细胞GES-1以及人胃癌AGS、MKN-45、NCI-N87细胞系共培养,使用Western Blot方法检测DNA损伤关键蛋白γH2AX,以及修复蛋白Rad51、pCtIP、pMRE11的表达,以此来评估木犀草素对正常胃上皮细胞以及多种胃癌细胞DNA损伤及修复的影响。2.将木犀草素作用于人胃癌AGS细胞,使用中性彗星实验(单细胞凝胶电泳)进一步检测DNA损伤(双链断裂)的情况。3.将人胃癌AGS细胞与木犀草素共培养,使用免疫荧光技术检测DNA损伤关键蛋白γH2AX,以及修复蛋白Rad51的募集情况。4.将人胚肾HEK-293(DR-GFP)细胞与木犀草素培养,用流式细胞仪检测细胞内GFP 阳性细胞数目比例,以此来评估DNA损伤修复效率。结果1.药物处理GES-1细胞后DNA损伤标志性蛋白γH2AX和修复蛋白Rad51的表达均较空白对照组上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.药物处理AGS细胞后DNA损伤标志性蛋白γH2AX较空白对照组上调,(P<0.05);而修复蛋白Rad51及pCtIP的表达较空白组下调,差异具有统计学意义。3.药物处理NCI-N87细胞后DNA损伤标志性蛋白γH2AX较空白对照组上调(P<0.05);在药物浓度为40mmol/L时,DNA损伤修复蛋白Rad51、pCtIP、pMRE11的表达较空白组下调(P<0.05)。4.药物处理MNK-45细胞后γH2AX和pCtIP蛋白表达较空白对照组上调,(P<0.05);修复蛋白Rad51表达量在药物浓度控制在10mmol/L时较空白对照组下调,20mmol/L时下调更加明显;修复蛋白pMRE11表达量在药物浓度控制在20mmol/L和40mmol/L时较空白对照组下调(P<0.05),而在10mmol/L浓度下较空白对照组无明显差异(P=0.206),需要进一步分析及验证。5.药物处理AGS细胞后DNA损伤标志物γH2AX加药组均较空白对照组募集增多,药物浓度控制在20mmol/L较10mmol/L的募集增多(P<0.01)。DNA损伤修复蛋白Rad51加药组均较空白对照组募集增多,但是药物浓度控制在 10mmol/L 较 20mmol/L 的募集增多(P<0.05)。6.彗星实验证明药物浓度在20mmol/L时,拖尾现象较空白组增长。7.转染I-Scel内切酶后加药组均较未加药组GFP阳性细胞数目比例减少(P<0.05);转染I-Scel内切酶后加药组(20mmol/L)较加药组(10mmol/L)GFP阳性细胞数目比例减少(P<0.01)。结论木犀草素作用于不同人胃癌细胞后,在DNA损伤修复中诱导DNA双链断裂,一定程度上降低HR修复,促进胃癌细胞凋亡。