环形泰勒虫病是由泰勒科泰勒属的环形泰勒虫寄生于牛体内白细胞而引起的一种血液性原虫病,该病流行于北非、南欧、亚洲,在我国主要发生在北方的干旱和半干旱地区,如未及时治疗,死亡率高达80%,给畜牧业带来严重的经济损失。研究发现,环形泰勒虫在侵染宿主牛白细胞后,分泌一种肽基脯氨酰异构酶TaPIN1蛋白,该蛋白可异构化宿主细胞中一种泛素连接酶FBW7,致使其发生自身泛素化而降解,其负调控的一些下游原癌基因Jun/Fos家族的所有蛋白表达会出现上调,进而促使宿主细胞具有无限增殖与侵袭能力等癌化特点。通过环形泰勒虫致病机理可知,诱发宿主白细胞的不断增殖对环形泰勒虫的致病性来说是十分重要的环节。若能在这一环节上进行阻断,将为预防与治疗该病提供了新的思路和可能性,因此解析TaPIN1与FBW7蛋白复合物结构对于研发出特异性针对寄生虫的药物是十分必要的。在本课题研究中,我们利用了PCR技术扩增了TaPIN1基因和FBW7基因,将扩增产物克隆到原核表达载体pPGH中,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行融合蛋白诱导表达,并用PPase酶切验证是我们需要的目的蛋白,在通过离子交换层析和凝胶过滤层析后,我们得到了符合结晶要求的高纯度的TaPIN1(22-142)蛋白和FBW7(150-257)蛋白。然后,采取悬滴法对TaPIN1蛋白进行初筛,初筛试剂盒使用来自Hampton Research、Emerald Bio Systems和Molecular Dimensions三种不同的公司产品,互相弥补缺失的晶体生长条件,经过大量的初筛,我们得到了TaPIN1(22-142)蛋白晶体,为后续研究做铺垫。