【摘 要】
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昆虫细胞作为生物农药和基因表达的新型生物反应器而备受青睐。因此,不断发掘新细胞系,为科学研究和生产提供新资源,是目前研究的热点。
本研究以烟草天蛾(Manduca sexta)受
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昆虫细胞作为生物农药和基因表达的新型生物反应器而备受青睐。因此,不断发掘新细胞系,为科学研究和生产提供新资源,是目前研究的热点。
本研究以烟草天蛾(Manduca sexta)受精卵为材料,建立多株烟草天蛾胚胎细胞系,从中筛选了三株生长状况较好的细胞系,分别命名为QB-Ms1-8,QB-Ms2-2,QB-Ms2-7。并对其生物学特性进行研究,主要结果如下:
1.QB-Ms1-8,QB-Ms2-2,QB-Ms2-7三株细胞在辅以10%胎牛血清的TNM-FH培养基中28℃条件下传代培养50代以上,性状稳定,细胞以棱形为主,有少量圆形。
2.对QB-Ms1-8,QB-Ms2-2,QB-Ms2-7三株细胞与烟草天蛾卵的基因组DNA进行RAPD-PCR鉴定,结果表明各细胞株与烟草天蛾卵具有相同的DNA扩增谱带。
3.测定了QB-Ms1-8,QB-Ms2-2,QB-Ms2-7三株细胞的生长曲线和群体倍增时间,QB-Ms2-2细胞在生长第6d达到最大值,达到1×106cells/mL,QB-Ms1-8,QB-Ms2-2,QB-Ms2-7三株细胞的群体倍增时间分别为61,37,46h。
4.病毒侵染试验表明,QB-Ms1-8,QB-Ms2-2,QB-Ms2-7三株细胞对AcMNPV不敏感,感染率分别为33%、40%、36%,平均每个细胞病毒多角体(OBs)产量非常低。
5.重组蛋白表达水平测定表明,QB-Ms1-8,QB-Ms2-2,QB-Ms2-7三株细胞的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)表达量较低,但是QB-Ms2-2细胞的分泌型碱性磷酸酶(secreted alkaline phosphatase,SEAP)表达量2.33IU/mL与BTI-Tn5B1-4的蛋白表达量2.28 IU/mL相当,作为重组蛋白表达,是有潜力的生物资源。
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