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新型上皮性钙通道成员TRPV5TRPV6表现为对钙离子具有高度选择性,对钙离子代谢及骨代谢有着非常重要的作用。但目前TRPV5、TRPV6在成骨细胞上是如何调节成骨细胞的增殖及功能的作用机制、以及其表达的量及其功能的改变受何种因素调节尚不十分清楚。本研究旨在探讨TRPV5及TRPV6在成骨细胞中的表达规律及雌激素、维生素D3的干预作用效果,为认识世界性的医学难题老年性骨质疏松的发病机制提供实验依据。本研究大致分为体内实验及体外实验两部分。体内实验部分:成年雌性去势大鼠抗骨质疏松治疗及相关基因表达。研究女性绝经期后骨质疏松情况常用去势雌性大鼠作为动物模型。我们在此基础上对模拟女性绝经期的去势大鼠进行抗骨质疏松的干预治疗及相关研究。给去势大鼠每周一次注射治疗剂量的苯甲酸雌二醇及维生素D3注射液,共计8周。处死动物后进行骨密度、骨形态计量学、血清骨代谢等指标检测,通过RT-PCR技术检测股骨组织中OPG、RANKL和M-CSF、TRPV5、TRPV6的表达情况。结果表明施加雌激素、维生素D3可在一定程度上拮抗去势大鼠骨质疏松,但是仍然不能完全逆转骨质疏松发生;雌激素的疗效优于维生素D3;在体内去势大鼠实验表明雌激素通过刺激OPG、RANKL的表达通路来介导成骨细胞增生;并且促进钙离子通道TRPV6表达,说明了钙离子和OPG/RANKL作为信号传递递质参与雌激素的成骨作用。体外实验部分:对雌性大鼠颅骨来源成骨细胞的干预试验。雌性大鼠颅骨来源成骨细胞培养并鉴定后,给予传代的成骨细胞以不同浓度的17-β雌二醇、1,25二羟维生素D3干预24小时,应用Western-blot和RT-PCR技术在蛋白质和mRNA水平检测成骨细胞内OPG、RANKL、TRPV5和TRPV6的表达情况,应用激光共聚焦显微镜观察不同浓度雌激素干预后成骨细胞内钙离子含量的变化,间接反映钙离子通道功能及表达情况。结果发现随着雌激素暴露时间的延长,成骨细胞的增殖活性升高,同时雌激素诱导成骨细胞OPG和TRPV5/TRPV6的mRNA及蛋白质表达呈剂量依赖性。体外实验说明OPG和钙离子通道TRPV5/TRPV6在雌激素刺激成骨作用中具有一定作用。利用体外成骨细胞培养观察1,25二羟维生素D3对成骨细胞的作用发现,1,25二羟维生素D3只有在极低的浓度下刺激成骨细胞的增生,并且促进成骨细胞OPGmRNA水平的明显表达,增加了钙离子通道TRPV5/TRPV6的表达,显示出1,25二羟维生素D3的成骨作用需要OPG和钙离子信号通路的参与。