【摘 要】
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表面等离子共振(Surface Plasmon resonance,SPR)技术是基于传感芯片表面金属膜上配体与受体相互作用引起折射率变化,继而带来SPR光学信号改变的一种物理光学分析技术,具有监测
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表面等离子共振(Surface Plasmon resonance,SPR)技术是基于传感芯片表面金属膜上配体与受体相互作用引起折射率变化,继而带来SPR光学信号改变的一种物理光学分析技术,具有监测分子间相互作用、灵敏度高、响应性能好等优点。分子印迹技术(Molecularly Imprinting Technology,MIT)是一种模拟抗原-抗体间相互作用力的新技术,可实现选择性识别、特异性强。本文结合二者的优势,构建了MIT-SPR手性传感器,对手性氨基酸进行识别,并对其机理进行研究。论文的主要内容和结果如下:(1)功能化石墨烯分子印迹聚合物的制备与表征:采用“一锅法”,将功能单体盐酸多巴胺(DA)、模板分子(L-Trp)、氧化石墨烯(GO)、引发剂过硫酸铵(APS)在60℃下反应,再用盐酸-甲醇溶液洗脱模板分子,合成手性功能化石墨烯分子印迹聚合物。优化了功能化石墨烯分子印迹聚合物的制备条件,GO与L-Trp的质量比为0.6,DA与L-Trp的摩尔比为1,过硫酸铵(APS)的用量与DA的质量比2,反应时间为4h时,对L-Trp的吸附量达到最大,为50mg/g,此时分离因子为1.55。(2)分子印迹传感器的构建及分析:分别采用光聚合和热聚合方法制备MIT-SPR传感器芯片,构建了MIT-SPR传感器。扫描电镜结果表明,热聚合法制备的芯片更为均匀且平均厚度为13.65μm;光聚合芯片的平均厚度为29.25μm。SPR分析显示,传感芯片对L-Trp产生的响应值比D-Trp更高。在0.15-2.5mmol/L的范围内,传感芯片对L-Trp相对于D-Trp具有更好的线性关系,R2为0.99。MIP-SPR对L-Trp表现出较好的亲和力,结合速率常数和解离速率常数分别为7×106、9×10-6。(3)功能化石墨烯分子印迹手性SPR传感器对手性氨基酸的识别机理研究:分子模拟结果表明L-Trp与聚多巴胺的结合能力高于D-Trp,D-Trp与聚多巴胺存在两个氢键作用,L-Trp与聚多巴胺则存在三个氢键作用。区别于D-Trp,L-Trp的氨基氢与功能单体聚多巴胺上的酚羟基氧之间的分子间氢键作用是分子印迹聚合物产生结合位点的关键作用,使得经过洗脱后形成的印迹位点无论从空间形状上还是化学键上,都只能与印迹分子L-Trp相匹配,因此实现了功能化石墨烯分子印迹聚合物对L-Trp的特异性识别。
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