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异三聚体G蛋白介导的信号转导途径是真核生物中最重要、最保守的信号转导途径之一。目前已知的异三聚体G蛋白的主要组分包括α亚基、β亚基、γ亚基和G蛋白信号转导调节蛋白(RGS)。α亚基在G蛋白被激活后与βγ二聚体分离,后又在RGS蛋白的作用下与βγ二聚体重新结合到一起;β亚基和γ亚基以βγ二聚体的形式发挥作用;RGS蛋白是G蛋白信号转导途径的负调控因子,可以加速α亚基的失活从而终止G蛋白介导的信号转导过程。 本文以甘蓝型油菜扬油6号及以其为亲本获得的转基因株系为材料,研究了油菜G蛋白各组分的亚细胞定位以及相互作用、G蛋白在油菜ABA信号响应中的作用以及对油菜品质形成的影响和可能的作用机制。取得的主要结果如下: (1)克隆了甘蓝型油菜BnGA1、BnGB1、BnGG2和BnRGS1基因。BnGA1全长1152bp,编码分子量为20kDa,等电点为5.83的多肽,包含有一个Gα功能域。BnGB1全长1137bp,编码分子量为57kDa,等电点为6.66的多肽,包含有7个β亚基标志性的WD40功能域。BnGG2全长303bp,编码分子量为17kDa,等电点为4.69的多肽,包含有一个Gγ功能域。BnRGS1全长1380bp,编码分子量为52.6kDa,等电点为8.43的多肽,N端具有七次跨膜区域,C端具有RGS box。 (2)通过洋葱表皮细胞和烟草叶片瞬时表达分析G蛋白各组分的亚细胞定位,结果表明:BnGA1定位于细胞膜,BnGB1在细胞膜上呈点状分布,BnGG2定位在细胞膜和细胞核,BnRGS1定位于细胞膜。 (3)通过酵母双杂交分裂泛素系统研究G蛋白各组分之间的相互作用,结果表明BnGB1蛋白和BnGA1蛋白、BnGG2蛋白和BnGA1蛋白、BnGA1蛋白和BnRGS1蛋白、BnGG2蛋白和BnGB1蛋白、BnRGS1蛋白和BnGB1蛋白之间存在相互作用,BnGG2和BnRGS1之间没有相互作用。 (4)优化了油菜原生质体提取和质粒转化的方法,用不同浓度的ABA处理转基因原生质体,结果表明G蛋白的各组分参与了甘蓝型油菜对ABA的应答反应。 (5)与野生型油菜扬油6号相比,转基因植株中必需脂肪酸和蛋白质含量增加,硫苷含量降低,必需脂肪酸合成关键酶基因fad2、fad3、fad6、fad7和fad8的表达量增加。表明G蛋白α亚基和RGS蛋白组分负调控脂肪酸合成过程中的酶系统进而影响脂肪酸的合成。