高容量、高选择性修饰肽段磁分离纳米材料的制备与应用研究

来源 :华东理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xinghun124
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生物体中低丰度的翻译后修饰蛋白和肽,包括磷酸化蛋白/肽、糖基化蛋白/肽等,对各项生命活动过程起着调控作用。对生物样品中的翻译后修饰蛋白/肽进行分析研究十分重要。然而,生物样中高丰度的蛋白/肽严重干扰了低丰度翻译后修饰蛋白/肽的测定。因此,发展高选择性、高容量的翻译后修饰蛋白/肽分离富集磁性材料,实现高灵敏度检测,对进一步深入研究翻译后修饰蛋白和肽具有重要意义。  采用回流沉淀法和原位还原法,以聚甲基丙烯酸缩水甘油酯包覆磁球,并修饰Au纳米颗粒,进而螯合L-半胱氨酸,制备了两性磁性材料。该方法简便易行,螯合了大量两性基团为富集糖基化肽段提供了丰富的作用位点。将其应用于生物样品中糖肽的分离富集,富集检测限为5 fmol,富集容量达75 mg g-1,富集回收率为89.8%。将其应用于实际样品鼠肝蛋白酶解液中糖肽的分离富集,共检测并识别出411条N-糖基化肽段的774个糖基化位点。  采用溶剂热法和交联法,制备Ti4+修饰交联壳聚糖包覆的磁性氧化石墨烯复合材料。材料制备过程简单,材料表面交联壳聚糖量达12.67%,为修饰固定Ti4+提供了大量的作用位点。基于Ti4+和磷酸肽之间的螯合作用,将该磁性材料应用于分离富集蛋白酶解液中的磷酸肽,该材料对磷酸肽显示出较高的选择性(β-酪蛋白酶解液/牛血清白蛋白酶解液摩尔比,1∶400),富集检测限低至0.5 fmol,富集容量为66.6 mg g-1,富集回收率高达93.11%。此外,该材料成功从脱脂牛奶中鉴定出13条磷酸化肽,人血清中鉴定出4条内源性磷酸肽。  在磁球外包裹聚合物,键合磷酸酯钛并螯合Ti4+,制备出Ti4+固载量高达25.12μgmg-1的磁性纳米材料并应用于富集生物样品中的磷酸化肽,该材料富集容量为80 mg g-1,富集回收率高达91.92%。由于其对磷酸肽较强的亲和力,在癌症患者人血清内源性磷酸肽富集中表现出较好的效果。
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