妊娠前、后期营养限制对山羊骨发育和骨代谢的影响及机制研究

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本文选取湘东黑山羊作为实验动物,在妊娠前期和妊娠后期进行40%的采食量限制,检测营养限制后母羊骨代谢指标、胎羊生长性能、骨骼的形态发育和骨骼发育相关的代谢指标、骨骼代谢相关基因表达水平,以及母羊血清、羊水和尿囊液中氨基酸水平等指标,以期初步解析骨骼程序化抑制的分子机理,为实际生产中调整湘东黑山羊在妊娠期的饲养措施提供重要的参考。试验结果如下:  1胎羊生长  在妊娠前期营养限制时,与对照组相比,营养限制组胎羊的体长、体重和胸围均显著增加(P<0.05);而在妊娠后期,营养限制组的胎羊体重显著降低(P<0.05)。  2氨基酸含量  (1)母羊血清氨基酸。营养限制条件下,妊娠前期母羊血清必须氨基酸中缬氨酸(Val)、非必须氨基酸中天冬氨酸(Asp)和脯氨酸(Pro)含量显著低于正常饲喂组(P<0.05);妊娠后期母羊血清中的必须氨基酸赖氨酸(Lys)、非必须氨基酸中Asp、谷氨酸(Glu)和Pro含量显著低于对照组(P<0.05)。  (2)羊水氨基酸。妊娠前期,羊水中必须氨基酸Val和Lys含量显著低于对照组(P<0.05)。另外,妊娠后期营养限制对所有氨基酸含量均有显著降低(P<0.05)。  (3)尿囊液氨基酸。妊娠前期,尿囊液中必须氨基酸苏氨酸(Thr)、蛋氨酸(Met)和非必须氨基酸丝氨酸(Ser)、甘氨酸(Gly)受到营养限制的影响显著增加(P<0.05)。另外,妊娠后期营养限制显著降低谷氨酸(Glu)含量、显著增加脯氨酸(Pro)含量(P<0.05)。  3骨发育代谢  (1)胎羊骨生长。与对照组相比,妊娠前期营养限制显著提高胎羊股骨重、股骨长、股骨直径、肱骨重和肱骨长(P<0.05)。而妊娠后期营养限制对胎羊股骨和肱骨的生长性能没有显著的影响(P>0.05)。  (2)母羊骨代谢转换指标。妊娠前期营养限制条件下,母羊血清仅甲状旁腺激素(PTH)含量显高于对照组(P<0.05),骨碱性磷酸酶(BALP)有增加趋势(P=0.05)。妊娠后期营养限制条件下,营养限制的母羊血清中仅Ⅰ型胶原氨基末端肽(INTP)含量显著高于对照组(P<0.05)。  (3)胎羊骨代谢指标。在妊娠前期的营养限制组,胎羊的脐带血血清中Ⅰ型胶原羧基末端肽(CTX-Ⅰ)、Ⅰ型胶原氨基末端肽(INTP)含量与对照组相比显著降低(P<0.05)。而妊娠后期营养限制组胎羊脐带血血清中INTP含量显著低于对照组(P<0.05)。  4骨代谢发育相关基因的mRNA表达  (1)母羊肝脏中骨代谢相关基因的表达。妊娠前期采食量限制显著降低母羊肝脏中VDR的mRNA表达(P<0.05)。妊娠后期营养限制对母羊肝脏ALPL、BGLAP、BMP2和VDR的mRNA表达均无显著影响(P>0.05)。  (2)胎羊肝脏中骨代谢相关基因的mRNA表达。妊娠前期,胎羊肝脏中ALPL、BGLAP、BMP2和VDR基因的mRNA表达均没有受到营养限制的影响(P>0.05)。妊娠后期,胎羊肝脏中BGLAP基因的mRNA表达受母体营养限制的影响显著增加(P<0.05)。  (3)妊娠前期胎羊股骨中骨代谢相关基因的mRNA表达。妊娠前期营养限制显著提高了胎羊股骨中BGLAP的表达(P<0.05),同时显著降低了Wnt信号通路中LRP5的表达(P<0.05)。妊娠前期营养限制显著增加与破骨代谢相关的OPG/RANKL/RANK信号通路中基因OPG的表达。Smads途径中Smad1基因表达水平受到营养限制的影响而明显增加(P<0.05)。  通过以上试验发现,营养限制在妊娠前期可促进胎儿及其骨骼的生长,使得母羊骨代谢活动有增强趋势,影响钙代谢机制,胎羊破骨代谢减弱;在妊娠后期抑制胎儿的生长,但对骨骼生长没有影响,同时母羊破骨代谢活动增强,而胎羊破骨代谢活动减弱。营养限制引起母羊和胎羊代谢活动的改变,进而影响如羊水和尿囊液中营养因素的改变,可能作为协助预测胎儿宫内生长发育和胎羊骨骼发育代谢的指标。本研究明确了妊娠前期采食量限制对母羊和胎羊骨发育代谢活动的影响的潜在机理,并对妊娠后期相应机理进行了初步探索。
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