利用马血制备氯化血红素技术的研究

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马血血红蛋白中含有丰富的血红素,血红素是一种重要的含铁卟啉配合物,是一种无毒副作用的生物态补铁剂。当血红素脱离珠蛋白后,迅速被氧化为高铁血红素,所以利用马血制备的的血红素一般为氯化高铁血红素。本试验以新疆马的抗凝血为实验材料,对氯化血红素四个制备阶段:红细胞破胞、血红素与珠蛋白拆分、氯化血红素提取分离及氯化血红素的纯化的工艺条件进行了优化。研究结果如下:(1)以氯化血红素得率为指标,研究了超声波破胞功率、破胞剂比例、破胞时间对红细胞破胞效果的影响,并与混合试剂破胞法进行比较。通过正交试验可以得出超声波破胞法的最佳工艺条件:超声波破胞功率0.8kW、破胞剂(水:乙醇)比例15:1、破胞处理6min。(2)以珠蛋白与血红素的拆分率为检测指标,在单因素试验的基础上,采用Box-behnken响应曲面设计,研究了pH值、丙酮添加量、处理时间对珠蛋白与血红素拆分率的影响,得到工艺条件模型,确定最佳的工艺条件:丙酮添加量是红细胞体积的5.25倍、pH值2.86,处理3.38h,实际拆分率为95.83%,与模型的预测数据基本相符。(3)以氯化血红素的纯度及得率作为检测指标,通过正交试验得出用CMC-Na法提取氯化血红素的最佳工艺条件:CMC-Na添加量为0.45g、pH值6.0,提取8h,氯化血红素纯度及得率分别为29.42%和56.08%;用乙酸钠法提取氯化血红素的最佳工艺条件:乙酸钠添加量为氯化血红素丙酮抽提液体积的2.0%,pH值4.8,提取15h,氯化血红素纯度及得率分别为36.30%和44.88%。CMC-Na法提取氯化血红素的优势在于血红素和羧甲基纤维素钠络合物可直接作为抗贫血药的压片原料,而乙酸钠法提取氯化血红素的优势在于所得粗品氯化血红素纯度较高,后期纯化简单,总体制备成本较低。(4)以氯化血红素的纯度为检测指标,采用酸碱法分离纯化血红素,研究了氨水浓度、料液比、酸化处理时间对氯化血红素纯度的影响,选用高效液相色谱对纯化的血红素进行鉴定。通过正交试验得出最佳工艺条件:氨水浓度为1.5%,料液比为1:30,酸化处理10min,纯化后的氯化血红素的纯度可以达到92.87%。
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