【摘 要】
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该课题的研究,主要涉及基因工程制备重组降钙素(recombinant calcitonin,rCT),研究的结果可用于产业化规模制备rCT,研究的结果可用于产业化规模制备rCT,也为基因工程制备其他
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该课题的研究,主要涉及基因工程制备重组降钙素(recombinant calcitonin,rCT),研究的结果可用于产业化规模制备rCT,研究的结果可用于产业化规模制备rCT,也为基因工程制备其他活性肽提供借鉴.主要的研究内容包括,(1)CT cDNA的克隆、表达载体和工程菌的构建.(2)CT的工程菌的高密度发酵和诱导表达.(3)降钙素前体(precursor of calcitonin,preCT)的分离纯化.(4)化学合成氨基化合物和preCT的体外酰胺化.(5)rCT活性的测定.(6)rCT溶液构象和功能关系的探索.作者们获得了具有与化学合成的hCT、sCT生物活性相当的rhCT、rsCT,总产率:rhCT70-90mg/L,rsCT30-50mg/L.研究中建立的有关基因工程制备rCT的技术路线尚未见国内外有类同的报道.为探索CT结构和功能的关系,作者们借助2DNMR技术对二硫键被保护后的CT的溶液构象进行研究.发现rsCT分子中CysS经S-磺酸化保护后,分子N端α-螺旋成分增加,导致整个分子中α-螺旋结构增加,α-螺旋位于Ser<5>-Thr<21>之间,比在相同溶剂系统和甲醇溶剂中的sCT(含二硫键)的α-与sCT在SDS溶剂系统的α-螺旋长度相似.SO<,3>-rsCT中虽然二硫键被破坏,但是提高了整分子的柔性,同时不影响α-螺旋和分子柔性与其降血钙活性有关.
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