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嗜麦芽寡养单胞菌病是近年来发生的一种严重危害斑点叉尾鮰的传染性细菌病,该病具有发病突然,死亡率高,传染快等特点,已对我国斑点叉尾鮰养殖造成了严重的影响。该病临床症状以体表出现圆形、椭圆形或不规则的褪色斑,腹水、肠炎和肠套叠为病变特征。为了达到早期、快速与准确诊断该病的目的,本试验建立了一种特异性强、快速诊断斑点叉尾鮰嗜麦芽寡养单胞菌病的间接ELISA法。以本实验室分离并鉴定的斑点叉尾鮰源嗜麦芽寡养单胞菌为抗原,免疫兔获得高免血清,运用饱和硫酸铵盐析和羟基磷灰石Ⅱ层析技术,获得高活性的电泳纯IgG,建立了检测斑点叉尾鮰源嗜麦芽寡养单胞菌的间接ELISA法。经反复筛选,确定其最佳工作条件为:0.05mol/L pH9.6碳酸盐缓冲液作为包被液,60℃烘干包被抗原,抗原包被浓度为106cfu/ml,5%脱脂乳-PBST作为封闭液,37℃封闭90min,兔抗嗜麦芽寡养单胞菌血清工作浓度为2μg/ml,37℃孵育60min,HRP标记羊抗兔IgG稀释为1:10000,37℃孵育60min,底物感作时间为20min。血清、肝、肾、脾、脑、鳃阴阳性结果判定的临界OD450值分别为0.313、0.159、0.324、0.232、0.170、0.300。重复性试验结果,板内变异系数为5.21%,板间变异系数为6.15%,变异系数都小于10%,说明该方法的板内、板间重复性好。建立的间接ELISA法具有较高的特异性,与嗜水气单胞菌、鮰爱德华氏菌、维里纳气单胞菌、鲁氏耶尔森氏菌、豚鼠气单胞菌无交叉反应。建立的间接ELISA法的检测灵敏度为105cfu/ml,即每孔的检测限为104cfu,说明建立的该方法具有较高的敏感性。用间接ELISA法检测人工感染斑点叉尾鮰不同时间的血清,肝、肾、脾、脑、鳃组织器官,脾的检出率达100%,其次为肾、肝、鳃、血清,检出率分别为95%、90%、80%、70%,脑检出率仅5%。因此,采用该方法检测嗜麦芽寡养单胞菌应以脾、肝组织器官为首选。