【摘 要】
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艾美耳球虫(Eimeria)是危害多种动物健康的主要病原之一,亦是研究顶复门原虫生物学和免疫学特性的重要模式生物。前期研究已建立了艾美耳球虫的瞬时转染、筛选等反向遗传操作
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艾美耳球虫(Eimeria)是危害多种动物健康的主要病原之一,亦是研究顶复门原虫生物学和免疫学特性的重要模式生物。前期研究已建立了艾美耳球虫的瞬时转染、筛选等反向遗传操作平台。但受艾美耳球虫难以进行体外培养、转染效率低下等因素的影响,尚未建立有效的基因编辑技术,限制了对艾美耳球虫基因功能的研究。CRISPR/Cas9系统是一类高效、强大的基因编辑工具,已广泛应用于多种生物体的基因编辑。本文建立了基于CRISPR/Cas9系统的艾美耳球虫基因编辑系统,主要发现和结论如下:1.柔嫩艾美耳球虫组蛋白4启动子和核定位序列能够调控SpCas9核酸内切酶表达至子孢子细胞核部位,是Cas9对球虫核基因组进行剪切的基础。2.柔嫩艾美耳球虫有两个U6启动子,均能有效调控sgRNA的表达,且表达的sgRNA具有生物学活性。3.CRISPR/Cas9系统介导艾美耳球虫基因组靶位点产生断裂位点。4.艾美耳球虫基因组断裂位点在同源片段存在的情况下能够进行同源重组修复。总之,本文证实CRISPR/Cas9系统可对艾美耳球虫进行基因编辑,将促进艾美耳球虫基因功能的研究,具有重要意义。
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