拉曼光谱结合统计学分析神经母细胞瘤及相关肿瘤成分的差异表达

来源 :华中科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chunyi19871225
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目的:每种生物皆由脂质、氨基酸、核酸、碳水化合物等物质组成,当生物组织细胞发生增值、衰减、变异、病变时,生物分子的成分、构型、构象都会发生改变,这些变化可以被拉曼散射检测到,并形成特有的拉曼散射光谱,通过研究光谱可以获得生物分子的信息。目前诊断肿瘤的金标准仍为有创的病理诊断,临床尚未发现有效的快速无创的诊断方法。为了解神经母细胞瘤、节细胞神经瘤及节细胞神经母细胞瘤中不同类型分子上的细微差异,我们对经母细胞瘤、节细胞神经瘤及节细胞神经母细胞瘤的拉曼光谱进行了研究。证明神经母细胞瘤、节细胞神经母细胞瘤及节细胞神经瘤,以及其相关分类均具有各自不同的拉曼指纹普,这将可能成为区别该类肿瘤病理分型及相关分类之间的基础。同时寻找不同分类的拉曼指纹普中具有特征性差异的分子,这将有可能成为开启该类肿瘤发生发展中相关分子的作用机制研究中的关键。方法:采用华中科技大学同济医学院附属同济医院病理科近十年来石蜡包埋冰冻保存的已经确诊为神经母细胞瘤29例、节细胞神经母细胞瘤13例及节细胞神经瘤1例的手术或活检标本及相关标本的所有疾病信息以作为患儿肿瘤诊断及分类的金标准。将每个标本解冻后切片成10μm固定于镀金玻片后脱腊处理。根据已有的患儿资料,将对应的标本分为神经母细胞瘤(29例)、节细胞神经母细胞瘤及节细胞神经瘤(14例);根据病理组织预后分类分为确诊神经母细胞瘤中预后良好型(19例)、预后不良型(19例);根据临床肿瘤INSS分期分为1期(20例)、2期(7例)、3及4期(15例);根据治疗后实际生存情况,选取其中获得预后结果的样本分为1年内死亡及复发(12例)、1年生存(20例)、3年生存(5例);根据危险程度分为低危(22例)、中高危(19例);神经母细胞瘤根据组织分化程度分为未分化(6例)、分化(19例)。使用Renishaw拉曼显微镜,从每个样本的不同区域收集至少24个光谱,选择光谱区域为400-2000 cm-1,该区域被称为生物指纹区。对采集的信息使用MATLAB软件进行主成分分析及线性判别分析(PCA-LDA),再对获得的图谱信息进行统计学分析。结果:PCA-LDA一维及二维图显示上述分组各组间区分度和组间差异明显(P<0.05),上述各分组组间协方差矩阵分析显示在生物指纹区的交叉峰亦存在明显的差异。矢量聚类分析显示各分组组间皆存在具有统计学差异的特征性的分子吸光度显著升高或降低处,如在神经母细胞瘤、节细胞神经瘤及节细胞神经母细胞瘤中分组中,相较于节细胞神经瘤及节细胞神经母细胞瘤组,神经母细胞瘤组在Tyrosine(1169cm-1)、DNA/RNA bases(1373cm-1),C-H bending band of lipids(1439cm-1)分子吸光度显著升高(P<0.001),在carbohydrates(905 cm-1)、amide III(1325cm-1)分子吸光度明显降低(P<0.001)。结论:神经母细胞瘤、节细胞神经母细胞瘤及节细胞神经瘤的生物信息可从拉曼光谱中得到体现。拉曼光谱可以提供不同肿瘤之间、同种肿瘤不同分类之间的具有特征性差异的分子光谱信息。结果表明神经母细胞瘤与研究中的非神经母细胞瘤之间的生物分子组成及结构有明显的不同,拥有各自不同的分子指纹;该类肿瘤不同临床分期之间,不同预后分类之间、不同危险程度之间、肿瘤组织不同的分化程度之间,以及不同的实际预后方面均具有各自的拉曼指纹普。这些指纹普将可能成为区别该类肿瘤病理类型及相关各个分类的依据,具有诊断和分类该类肿瘤的潜在可能性。拉曼指纹普中具有明显差异的分子如酪氨酸、碳水化合物、类胡萝卜素等将可能成为开启该类肿瘤发生发展中相关分子作用机制研究的关键。
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