【摘 要】
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血液净化技术可有效清除病人血液中内源和外源性毒素,通过直接去除血液有害成分的方法可以高效、快速的控制病情,目前在临床中广泛应用于治疗肝衰、肾衰、脓毒血症、自身免疫疾病等危重疾病。其中,血液灌流吸附是清除中、大分子毒素和血液结合毒素的主要手段。针对目前常用的血液灌流材料主要基于疏水性树脂和活性炭基质,难以实现针对特定毒素的高选择吸附的缺陷,本论文希望开发一种血液相容性好、对血液蛋白非特异性吸附小,且
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血液净化技术可有效清除病人血液中内源和外源性毒素,通过直接去除血液有害成分的方法可以高效、快速的控制病情,目前在临床中广泛应用于治疗肝衰、肾衰、脓毒血症、自身免疫疾病等危重疾病。其中,血液灌流吸附是清除中、大分子毒素和血液结合毒素的主要手段。针对目前常用的血液灌流材料主要基于疏水性树脂和活性炭基质,难以实现针对特定毒素的高选择吸附的缺陷,本论文希望开发一种血液相容性好、对血液蛋白非特异性吸附小,且能够用于高选择吸附介质制备的载体基质,并将其用于特异性全血灌流吸附介质的开发。基于此,本研究探索了以亲水性聚合物——聚乙烯醇(PVA)为材料主体的微球材料制备工艺,重点研究了可满足血细胞通过性要求的大粒径微球(300-800μm)的制备方法。进一步,以此为载体材料通过固载特异性纳米抗体合成了对人血液中中分子毒素β2微球蛋白(β2M)具有选择性结合能力全血灌流吸附介质。具体内容如下:(1)大粒径PVA微球制备工艺研究。以PVA为原料,戊二醛为交联剂,通过悬浮分散聚合法制备PVA微球,重点研究了搅拌速度、PVA原料的聚合度及浓度等关键因素对PVA成球和粒径控制的影响,可实现粒径在300-1000μm范围内PVA微球的可控制备。结果表明,PVA原料的浓度和聚合度对于粒径控制影响最大。对于质量分数为8%的PVA原料,控制搅拌速度在400 r/min,获得平均粒径为500μm的微球产率为25.2%,为较优工艺。(2)PVA微球表征及血液相容性研究。乙酸酐滴定法测得PVA羟基官能团在交联成球过程中含量显著降低,但仍能保留约10-16 mmol/g,可满足进一步功能化修饰的需求;利用激光共聚焦显微镜观察牛血清白蛋白(MW 64 kDa)和增强型绿色荧光蛋白(MW 27 kDa)在微球中传质效果显示,常温温育3 h后两种蛋白均可进入微球内部空隙,有效传质体积大于60%;模拟全血灌流过程,动态溶血率低于2%,可满足血液净化材料对原料血液相容性的要求。(3)人β2M特异性免疫吸附剂制备及性能研究。利用共价偶联实现了抗人β2M纳米抗体的固定化,该吸附材料对BSA非特异性吸附较低(约为0.4 mg/mL),对人血浆中目标蛋白具有理想的的特异性吸附效果,应用于初始浓度为40 mg/L人β2M体系去除率大于65%,单位体积介质的吸附能力显著高于商业化树脂型吸附剂。
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