刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种可寄生于有核细胞的原虫,能感染人和动物,引发弓形虫病。成年人多为隐形感染,但对于某些特定人群,感染可引起严重的临床症状,这些人群包括孕妇、艾滋病、器官移植、恶性肿瘤患者等。临床实验室弓形虫检测主要依靠免疫血清学检测,检测项目通常包括特异IgM和IgG等。在检测中,为了排除假阴性结果,控制检验操作过程,保证检测结果准确可靠,需要阳性质控品进行室内质量控制和室间质量评价。我们前期的研究采用基因工程抗体技术将鼠的抗弓形虫P30抗原IgG抗体可变区基因与人IgM抗体恒定区基因进行了拼接,在哺乳动物细胞中表达得到了鼠-人嵌合抗弓形虫IgM抗体,对嵌合抗体作为IgM检测质控替代品进行了探索,但是此嵌合抗体仅针对弓形虫P30抗原,不能完全模拟人血清样本中的能针对弓形虫多个抗原多个表位的特异性抗体。针对此问题,本课题中我们拟用弓形虫天然抗原免疫家兔,测定效价后取兔外周血单个核细胞,经淋巴细胞分离液处理后提取总RNA,逆转录获得cDNA,作为模板,分别扩增兔抗弓形虫抗体轻链和重链可变区基因库,分别与人轻链恒定区和重链恒定区基因重组,制备了人-兔嵌合型抗弓形虫IgM抗体轻链和重链基因库,未来其在哺乳动物细胞中表达后可得到多克隆抗体,或可从中进一步筛选出高亲合力的人-兔嵌合基因工程抗体,二者均可作为质控品的替代品。该嵌合型轻、重链基因库的成功克隆和人源化表达质粒的构建为下一步人源化人-兔嵌合型抗弓形虫抗体IgM抗体的表达和高亲合力抗体的筛选打下了基础,并向人-兔嵌合型抗弓形虫抗体IgM作为弓形虫抗体IgM检测质控品的应用迈进了一步。弓形虫特异IgG抗体的免疫血清学检测方法有多种,以酶联免疫法和化学发光方法在临床实验室筛查检测中最为常用。目前我国能提供该检测试剂的厂家有多个,原理基本是间接法。无论采用何种检测方法和试剂,保证在不同实验室、不同‘试剂和方法间检测的结果具有可比性十分重要,这就是临床检验标准化的目的,实现临床检验标准化或结果可比性的重要前提是要有统一的量值溯源。为此,英国国家生物学标准物质和质控物研究所(National Institute for Biological Standards and Control, NIBSC)于2004年研制并提供了人抗弓形虫特异IgG抗体的国际标准品,编号为01/600,含量值为20IU,被世界卫生组织(World Health Organization, WHO)认定为第一代抗弓形虫IgG抗体国际标准物质。然而,国际标准物质不但较难获取,且价格非常昂贵,不适用于我国临床实验室大规模使用,而此类标准物质的研制又是有效开展医疗卫生工作的需要。因此,本研究参照了有关标准,研制了抗弓形虫IgG血清学参考物质,并取得国家一级标准物质证书(编号：GBW09192),建立和应用可溯源到国际标准的我国自己的标准物质。应用该参考物质,将不仅使我国人类抗弓形虫IgG血清学检测结果具有可比性,而且有了溯源性。其应用范围包括：(1)不同试剂、不同检测方法检测下限的确定；(2)依据该参考物质制备的标准系列血清可用作厂家试剂的工作标准；(3)用于临床实验室日常检测的质量控制等。此外,以其为标准制备的质控样本也被我们应用于抗弓形虫IgG抗体检测的室间质量评价,通过室间质量评价结果,临床实验室可了解本实验室结果与其他实验室结果之间的可比性,分析检测中可能存在的实际问题,并采取持续改进措施,又进一步促进了临床检验标准化。