中国猕猴桃主产区溃疡病病原菌鉴定及其致病力检测

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猕猴桃(Actinidia)原产于中国,是一种珍贵的果树资源,中国广大地区均有分布。由于猕猴桃适应性强,繁殖容易,对土壤的酸碱度等条件要求不严,一年种植多年受益,加之其果实经济价值较高、风味独特、用途广泛,特别是维生素C含量非常丰富,享有“果中之王”之美誉,因而被世界范围广泛种植。近年来,由于猕猴桃栽培面积迅速扩大,猕猴桃细菌性溃疡病(Kiwifruit bacterial canker)传播迅速,病害威胁日益增加,危害程度日趋严重。猕猴桃溃疡病是一种由丁香假单孢杆菌猕猴桃致病种(Pseudomonas syringae pv. actinidae)引起的毁灭性病害,先后在日本、美国、韩国及意大利等国相继被发现。最近,在法国、葡萄牙、西班牙、瑞士、新西兰及智利等国家也有猕猴桃发生溃疡病的相关报道。国内首先在湖南、安徽、陕西、四川等地发现了此病,现已扩展到十多个省份的猕猴桃产区,造成的经济损失巨大。通过不同区域猕猴桃溃疡病发病植株的枝条、叶片取样、对溃疡病致病菌进行分离纯化、病原鉴定和致病性试验;采用人工接种方法筛选猕猴桃抗病品种资源;利用16S rDNA和16S-23S rDNA间隔区序列(ITS)对溃疡病细菌近缘种(related species)、致病品种(pathogenic variety)和菌株(strain)的亲缘关系和进化进行研究。为猕猴桃溃疡病发生的准确快速鉴定、抗性品种资源的评价利用提供依据。研究主要结果如下:.1、从安徽省岳西县、陕西省户县及重庆市黔江等猕猴桃主产区的调查发现,猕猴桃溃疡病主要为害猕猴桃的主干、枝蔓和叶片。枝干发病初期,有乳白色的菌脓大量溢出、后变成锈红色的粘液附着在病斑表面,病斑上部新梢萎蔫枯死。叶片上典型症状表现为病斑中间出现深褐色坏死、病斑周围有不规则的黄色晕圈。2、从各地采集感染溃疡病的枝条和树皮中,共分离纯化得到10个分离物,代号分别为:SXQM、SXHWD、A18、A17、C33、SXHY、AKA5、AKB5、AK14、AK18。所有分离物均可使烟草叶片产生过敏反应,且使猕猴桃健康叶片发病。猕猴桃叶片接种试验结果,不同菌株对猕猴桃同一品种的致病力均存在差异,说明不同菌株的致病性存在差异。3、以意大利标准菌株为对照,对各菌株16S rDNA和16S-23S rDNA间隔区序列(ITS)克隆,分别均获得片段长度约1500bp和300bp的目的条带。将不同菌株PCR产物分别回收纯化,经测序分析发现,10株致病菌的DNA片段大小一致,均为1448bp和280bp,且序列相同。由此推测,试验获得的10个株菌为同一致病菌。16S rDNA序列Blast比对结果显示,该序列与已报道的丁香假单孢杆菌猕猴桃致病变种菌株GQ914994、A B001439、E U906856及AJ889840序列一致。16S-23S rDNA的序列Blast分析结果表明,该序列与已报道的丁香假单孢杆菌猕猴桃致病变种菌株JN172920.1、 HM032088.1、D86357.1及AY342165.1序列一致,在GenBank数据库中的登录号为JN629035和JQ314412。4、不同菌株对猕猴桃相同品种健康叶片离体接种,发现中华猕猴桃‘金阳’、‘金香’及‘雄株2号’品种易感病,美味猕猴桃品种‘金魁’和‘徐香’抗病能力较强。5、将丁香假单孢杆菌猕猴桃致病变种的不同菌株与相近的致病变种和病原物种进行聚类,结果发现菌株GQ914994、AB001439、EU906856及AJ88984016S rDNA的亲缘关系密切;而根据16S-23S rDNA聚类,菌株JN172920.1、HM032088.1、 D86357.1及AY342165.1的亲缘关系最近。但是,根据16S rDNA和16S-23S rDNA聚类,均不能将丁香假单孢杆菌猕猴桃致病变种与丁香假单孢杆菌茶叶致病变种(P. syringae pv. theae)区分开来。
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