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急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)是各种直接和间接致伤因素导致的肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤,造成弥漫性肺间质及肺泡水肿,导致的急性低氧性呼吸功能不全。以肺容积减少、肺顺应性降低、通气/血流比例失调等为病理生理特征,临床上表现为进行性低氧血症和呼吸窘迫,肺部影像学上表现为非均一性的渗出性病变。目前认为,感染、创伤后的全身性炎症反应是导致ALI的主要原因。控制原发病,遏制其诱导的全身失控性炎症反应,是预防和治疗ALI的必要措施,药物治疗仍以激素类抗炎和对症处理。金茵清热口服液(Jinyin Qingre Oral Liquid,下称:JYQR)是湖北中医药大学联合十堰市太和医院研制的中药复方制剂,具有清热解毒,凉血活血等功效,对内毒素血症引起的组织器官损伤具有良好的保护作用。临床应用发现JYQR用于治疗由病原微生物引起的呼吸系统感染导致的高热、肺部炎症、组织损伤效果良好。本课题对其防治LPS诱导的急性肺损伤小鼠的药效学和机制进行研究。目的:本文旨在利用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)建立急性肺损伤模型,探讨JYQR对急性肺损伤的防治作用及作用机制,为临床应用提供理论依据。方法:1.JYQR的制备及给药浓度的确定按照湖北省食品药品管理局批准的JYQR医院自制制剂制备工艺制备JYQR(每m L相当于原生药材1 g),并按照质量控制标准进行质量检查。将C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、JYQR(低、中、高剂量)组,分别造模、干预后,收集各组肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid,BALF),采用细胞计数仪和BCA蛋白检测法,分别检测BALF中总细胞数及总蛋白含量,确定JYQR最佳给药剂量。2.JYQR对LPS诱导的急性肺损伤小鼠的防治作用探讨JYQR对急性肺损伤小鼠模型的预防和治疗作用,JYQR预防作用研究在造模前预处理给药,治疗作用研究在造模后治疗给药。两个实验分别随机分为四组,空白组、模型组、JYQR组、地塞米松组。各组分别造模、干预后,收集BALF及肺组织样本。采用苏木素-伊红染色法观察各组小鼠肺组织结构差异,细胞计数仪检测BALF中总细胞数,BCA法检测BALF中总蛋白含量,ELISA法检测BALF中Ig M含量。3.JYQR对急性肺损伤小鼠NF-κB信号通路的影响取空白组、模型组、JYQR组、地塞米松组小鼠BALF和肺组织样本,采用ELISA法检测BALF中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的含量;采用蛋白免疫印迹法检测肺组织中NF-κB信号通路相关蛋白IκB,NF-κB p65及其磷酸化的表达情况;采用免疫组化检测NF-κB p65蛋白的表达并进行蛋白表达定位。结果:1.JYQR的制备及给药浓度的确定金茵清热口服液质量检测结果表明,制备的JYQR符合湖北省食品药品管理局批准的质量标准;给药浓度实验结果表明,与模型组相比,JYQR高剂量(16 g/Kg)干预后,小鼠BALF中总细胞数及蛋白含量明显降低(p<0.01)。2.JYQR对LPS诱导的急性肺损伤小鼠的防治作用JYQR预防作用实验结果显示,与模型组比较,JYQR组小鼠肺组织损伤显著改善,BALF中总细胞数、总蛋白含量、Ig M含量显著降低(p<0.05),预防效果与地塞米松无显著性差异(p>0.05)。JYQR治疗作用实验结果显示,与模型组比较,JYQR组小鼠肺组织损伤显著改善,BALF中总细胞数、总蛋白含量、Ig M含量显著降低(p<0.05),治疗效果与地塞米松无显著性差异(p>0.05)。3.JYQR抑制急性肺损伤小鼠NF-κB信号通路与模型组相比,JYQR预防组和治疗组小鼠BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量均显著性降低(p<0.05),与地塞米松组无显著性差异(p>0.05)。Western blot结果表明,与空白组相比,模型组小鼠肺组织中NF-κB p65及IκB蛋白的磷酸化比率显著上调(p<0.05);与模型组比较,JYQR预防组和治疗组NF-κB p65及IκB蛋白的磷酸化比率显著下调(p<0.05);免疫组化结果表明,与空白组相比,模型组的肺组织细胞核内NF-κB p65表达明显增多(p<0.05);与模型组比较,JYQR预防组和治疗组的肺组织细胞核内NF-κB p65表达显著下调(p<0.05)。结论:1.生产的JYQR符合质量标准,JYQR高剂量组对肺损伤作用明显,因此选择JYQR的给药浓度为16 g/Kg。2.JYQR可以通过下调IL-1β、IL-6、TNF-α炎性因子的表达,改善肺组织的病变程度,改善肺泡毛细血管通透性,发挥预防和治疗作用。3.JYQR能通过抑制NF-κB信号通路活化,发挥抗ALI的作用。