小麦赤霉病菌血清学检测方法的建立及其在品种抗病性评价中的应用

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本文对小麦赤霉病菌血清学检测方法的建立及其在品种抗病性评价中的应用进行了研究。主要内容如下: 1.采用液氮研磨法提取菌体孢内蛋白质,经离心、浓缩和纯化将蛋白浓度定溶到1mg/L。蛋白质浓度的测定采用考马斯亮蓝G-250方法,以牛血清蛋白制作标准曲线。以3株小麦赤霉菌的混合蛋白质作为免疫原制备多克隆抗体。 2.对来源于3只兔子的抗血清进行ELISA测定,取反应性最好(OD值最高)的抗血清经饱和硫酸铵沉淀和蛋白A亲和层析纯化,获得高纯度的多克隆抗体。间接ELISA法测得抗体的最高效价为1:64,000,对赤霉病菌蛋白的最低检测浓度为5ng/mL;与供试的6种镰刀菌(Fusarium spp.)有较高特异性反应,而与供试的非镰刀菌属真菌不发生交叉反应。 3.为验证实验结果,对纯化后的抗体进行了生物素标记,用双抗夹心法对实验样品进行了检测,其检测结果与田间调查结果和间接ELISA检测结果相符合。
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