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川崎病(Kawasaki disease KD)是一种病因不明、以全身非特异性血管炎为主要表现的疾病,以冠状动脉病变为主的心血管损害是影响预后最重要的因素,是儿童时期缺血性心脏病的主要原因。研究已经证实川崎病血管炎是一种慢性炎症反应过程。因此深入探讨川崎病恢复晚期血管病变的发病机制,对于制定科学合理的个体化治疗、随访和预后评估方案具有重要意义。第一部分川崎病恢复晚期血管病变的超声检测目的探讨川崎病恢复晚期是否存在持续的血管功能和结构的改变;提出评价川崎病恢复晚期血管病变预后的可行性方案。方法研究对象包括川崎病合并冠状动脉病变者51例,川崎病冠状动脉正常者50例,正常儿童103名作为对照组。观察指标包括肱动脉内皮功能(FMD%)、颈动脉僵硬度指数(stiffness)及颈动脉内一中膜厚度(IMT)。结果1、FMD%在冠状动脉病变组、冠状动脉正常组和对照组分别为5.2%±1.9%、6.8%±2.0%和13.2%±4.1%。冠状动脉病变组、冠状动脉正常组与对照组两两比较差异均具有统计学意义(p=0.036,p<0.01,p<0.01)。2、Stiffness在冠状动脉病变组、冠状动脉正常组和对照组分别为3.96±0.59、3.64±0.61和3.42±0.49。冠状动脉病变组与冠状动脉正常组和对照组比较差异具有统计学意义(p=0.012,p<0.01)。3、IMT在冠状动脉病变组、冠状动脉正常组和对照组分别为0.447±0.024mm、0.426±0.016mm和0.424±0.016mm。冠状动脉病变组与冠状动脉正常组和对照组比较差异具有统计学意义(p<0.01,p<0.01)。4、相关分析显示,FMD%、stiffness和IMT之间具有显著相关性。多元回归分析显示,年龄和分组是FMD%、stiffness和IMT的显著决定因素。小结1、川崎病恢复晚期存在内皮功能障碍、颈动脉僵硬度增加和颈动脉内一中膜增厚等血管功能和结构的改变。2、综合采用FMD%、stiffness和IMT等无创性超声检测指标可有效地评价川崎病恢复晚期血管病变。第二部分循环内皮祖细胞数量与川崎病恢复晚期血管病变的相关性研究目的探讨川崎病循环内皮祖细胞数量的变化及其与恢复晚期血管病变的关系。方法研究对象包括川崎病合并冠状动脉病变者21例,川崎病冠状动脉正常者20例,正常儿童22名。采用流式细胞术检测所有受试者外周血内皮祖细胞(EPCs)数量,同时测量肱动脉内皮功能、颈动脉僵硬度指数和颈动脉内—中膜厚度。结果1、EPCs/ul数量在冠状动脉病变组、冠状动脉正常组和对照组分别为2.0±0.6/ul、3.9±1.7/ul和3.9±1.1/ul。冠状动脉病变组与冠状动脉正常组和对照组比较差异均具有显著统计学意义(p<0.01,p<0.01)。2、EPCs/ul数量与FMD%、stiffness和IMT均具有良好的相关性(r=0.39,r=-0.51,r=-0.46)。小结1、川崎病恢复晚期合并冠状动脉病变者循环内皮祖细胞数量显著降低;循环内皮祖细胞数量可作为预测血管病变预后的生物学指标。2、循环内皮祖细胞数量与肱动脉内皮依赖性血管舒张功能呈显著正相关,与颈动脉僵硬度指数及颈动脉内—中膜厚度呈显著负相关,提示循环内皮祖细胞数量与川崎病恢复晚期血管病变程度密切相关。第三部分CRP和TNF-α基因多态性与川崎病血管病变的相关性研究目的探讨CRP和TNF-α基因多态性以及hs-CRP水平与川崎病易感性及其恢复晚期血管病变的关系。方法应用PCR技术及测序的方法对101名川崎病患儿和173名对照组儿童检测CRP基因-286位点、+1059位点、+1444位点和TNF-α基因-308位点单核苷酸多态性;同时采用酶联免疫吸附试剂测定血清hs-CRP浓度,采用超声方法检测颈动脉僵硬度指数。对CRP基因单核苷酸多态性与川崎病易感性、hs-CRP浓度、颈动脉僵硬度指数的关系,TNF-α基因-308位点多态性与川崎病易感性及其颈动脉僵硬度指数的关系进行分析。结果1、CRP基因多态性分析(1) CRP-286位点非CC基因型(即仅携带A和或T等位基因)频率在川崎病冠状动脉病变组是45.1%、对照组是28.9%(x~2=5491,P=0.019,OR=2.003,95%CI为1.116~3.594);CRP-286位点A和T等位基因频率之和在川崎病冠状动脉病变组是26.5%、对照组是14.7%(x~2=4.185,P=0.041,OR=2.068,95%CI为1.023~4.180)。(2) CRP+1059位点GG、GC和CC基因型及G/C等位基因频率在冠状动脉病变组、冠状动脉正常组和对照组间比较均无统计学差异。(3) CRP+1444位点非CC基因型(即CT/TT基因型)频率在川崎病冠状动脉病变组是19.6%、冠状动脉正常组是8.0%、对照组是8.1%(x~2=5.980,P=0.014,OR=2.875,95%CI为1.201~6.883);CRP+1444位点T等位基因频率在川崎病冠状动脉病变组是11.8%,冠状动脉正常组是4.0%(x~2=4.348,P=0.037,OR=3.273,95%CI为1.018~10.523)。(4)血清hs-CRP浓度在冠状动脉病变组、冠状动脉正常组和对照组分别为3.42±1.66mg/l、2.63±1.27mg/l和2.61±1.27mg/l。冠状动脉病变组血清hs-CRP浓度显著高于冠状动脉正常组及对照组(p<0.05,p<0.01)。(5)CRP-286位点CC、CA、CT、AT/AA/TT四种基因型血清hs-CRP浓度分别为2.31±1.03mg/l、3.55±1.59mg/l、3.28±1.56mg/l和3.85±1.69mg/l(p<0.01)。其颈动脉僵硬度指数分别为3.47±0.05、3.73±0.07、3.84±0.08和3.98±0.20(p<0.05)。(6)CRP+1059位点GG、GC和CC基因型血清hs-CRP浓度及颈动脉僵硬度指数比较均无统计学差异。(7)CRP+1444位点CC基因型和非CC基因型(即CT/TT基因型)血清hs-CRP浓度分别为2.65±0.12mg/l和3.56±0.25mg/l(p<0.01)。其颈动脉僵硬度指数分别为3.53±0.04和3.88±0.07(p<0.01)。2、TNF-α基因多态性分析(1)TNF-α基因-308位点非GG基因型(即GA/AA基因型)频率在川崎病冠状动脉病变组是29.4%、对照组是15.0%(x~2=5.711,p=0.017,OR=2.315,95%CI为1.151~4.654)。TNF-α基因-308位点A等位基因频率在川崎病冠状动脉病变组是17.6%,对照组是7.8%(x~2=4.421,P=0.036,OR=2.524,95%CI为1.042~6.113)。(2)TNF-α基因-308位点GG基因型和非GG基因型(即GA/AA基因型)颈动脉僵硬度指数分别为3.71±0.57和4.07±0.68(p=0.012)。小结1、CRP-286位点C/A/T单核苷酸多态性与川崎病合并冠状动脉病变的易感性有关。A和或T等位基因是川崎病合并冠状动脉病变的易感基因。2、CRP+1444位点C/T单核苷酸多态性与川崎病及冠状动脉病变的易感性有关。T等位基因是川崎病及合并冠状动脉病变的易感基因。3、CRP-286、CRP+1444位点单核苷酸多态性对血清hs-CRP浓度具有调节作用,并最终影响川崎病恢复晚期颈动脉僵硬度。CRP-286A和或T等位基因、CRP+1444T等位基因可作为川崎病恢复晚期血管病变的预测指标。4、CRP+1059位点G/C单核苷酸多态性与川崎病及冠状动脉损害的易感性、hs-CRP浓度及颈动脉僵硬度均无显著相关性。5、川崎病冠状动脉病变组hs-CRP水平显著增高,hs-CRP可作为川崎病恢复晚期血管病变的预测指标。6、TNF-α-308位点G/A单核苷酸多态性与川崎病合并冠状动脉病变的易感性有关,A等位基因是川崎病合并冠状动脉病变的易感基因。TNF-α-308A等位基因可作为川崎病恢复晚期血管病变的预测指标。