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在全球范围内，乳腺癌是女性最常被诊断出的癌症之一。肺癌是导致女性癌症死亡的最主要原因，其次是乳腺癌，然后是结直肠癌。导致乳腺癌患者死亡的主要原因并不是其原位肿瘤，而是肿瘤的远处转移。 雌激素是体内一种重要的类固醇激素，其对于体内葡萄糖稳态、免疫稳定性、骨骼健康、心血管健康、生育能力和神经功能都是不可或缺的。同时，雌激素也在多种激素敏感性癌症的发展和恶性进展中发挥作用，其中就包括乳腺癌。尽管相关研究有很多，但雌激素影响乳腺癌转移的具体分子机制并未阐明，因此，揭示其调控机制将为临床治疗乳腺癌提供新的指导。 对于乳腺癌的治疗，除了传统的手术、放疗和化疗等手段，靶向治疗因其特异性强、毒副反应小、基本不损伤正常组织等特性，成为关注的热点。 近年来的研究证实，硫化氢作为一种气体递质，参与调节生物体内多种重要生理功能。作为合成硫化氢的关键酶之一，胱硫醚-β-合成酶（CBS），在多种肿瘤组织中高表达，且被证实在肿瘤细胞增殖、迁移、抗凋亡等过程中起重要作用。 鉴于以上，我们提出科学问题：1、雌激素能否影响CBS的表达；2、若有影响，其分子机制如何；3、CBS在雌激素影响乳腺癌细胞迁移的过程中有何作用。 我们的研究以CBS为切入点，探讨其在乳腺癌细胞迁移中的作用，这项工作可能为使用组织特异性CBS抑制剂作为辅助治疗乳腺癌提供依据。 目的: 探讨17β-雌二醇（E2）调控CBS的分子机制，明确E2通过CBS/H2S对乳腺癌细胞迁移的影响。 方法: 1、E2对MCF-7乳腺癌细胞CBS蛋白表达及H2S释放的影响 1.1、E2上调MCF-7乳腺癌细胞中CBS蛋白表达 选择10-9、10-8、10-7、10-6M浓度的E2处理MCF-7细胞24h后，免疫印迹法检测MCF-7细胞中CBS蛋白表达情况。结果显示：与con组相比，不同浓度E2处理均可上调MCF-7细胞中CBS蛋白表达（**P＜0.01vs.con），分别增加了（44±9）%、（87±11）%、（91±21）%、（75±13）%；其中，10-8M浓度的E2效果较强（**P＜0.01vs.con），且在E2生理浓度范围内，故选择10-8M作为E2的处理浓度。 E2（10-8M）分别处理MCF-7细胞0、3、6、12、24、48h后，免疫印迹法检测CBS蛋白表达情况。结果显示：与con组相比，E2处理3h即可上调MCF-7细胞中CBS蛋白表达（**P＜0.01vs.con），增加了（35±22）%；且E2的作用持续至48h，CBS蛋白分别增加了（62±20）%、（54±9）%、（52±8）%、（54±18）%（**P＜0.01vs.con）。 提示E2可浓度依赖性、时间依赖性上调MCF-7细胞中CBS蛋白表达。 1.2、E2增加MCF-7乳腺癌细胞中H2S水平 选择10-9、10-8、10-7、10-6M浓度的E2处理MCF-7细胞24h后，自由基电极检测H2S水平。结果显示：与con组相比，10-9、10-8、10-7M浓度的E2可增加MCF-7细胞中H2S的水平（*P＜0.05vs.con，**P＜0.01vs.con），分别增加了（84±41）%、（79±15）%、（67±22）%；10-6M浓度的E2也可增加H2S水平，增加了（38±24）%，但与con组相比并无统计学差异（P＞0.05vs.con）。 E2（10-8M）分别处理MCF-7细胞0、3、6、12、24、48h后，自由基电极检测H2S水平。结果显示：与con组相比，E2（10-8M）处理6h即可增加MCF-7细胞中H2S水平（**P＜0.01vs.con），增加了（38±15）%；且E2的作用持续至48h（**P＜0.01vs.con），H2S水平分别增加了（61±13）%、（69±30）%、（71±27）%。 提示E2可浓度依赖性、时间依赖性增加MCF-7细胞中H2S水平。 2、E2通过CBS蛋白促进MCF-7乳腺癌细胞迁移 为明确CBS蛋白在E2促进MCF-7乳腺癌细胞迁移过程中的作用，转染scrambled siRNA（40nM）或CBS siRNA（40nM）12h后，加入E2（10-8M）处理36h，实时细胞分析仪检测细胞迁移情况。结果显示：转染scrambled siRNA后，加入E2处理，细胞迁移能力增强（**P＜0.01vs.con），增加了（85±38）%；转染CBS siRNA后，E2的作用被显著抑制（##P＜0.01vs.E2），细胞迁移降低了（65±6）%。 提示E2通过CBS促进MCF-7乳腺癌细胞迁移。 3、E2上调MCF-7细胞中CBS蛋白表达的分子机制 3.1、ER介导E2上调MCF-7细胞中CBS蛋白表达的作用 为明确ER在其中的作用，使用雌激素受体拮抗剂ICI（10-7M）预处理MCF-7细胞半小时后，加入E2（10-8M）、ERα激动剂PPT（10-9M）或ERβ激动剂DPN（10-9M）处理MCF-7细胞24h，免疫印迹法检测CBS蛋白表达情况。结果显示：与con组相比，E2与激动剂处理组CBS蛋白表达水平显著增加（**P＜0.01vs.con），E2组增加了（71±15）%，PPT组增加了（80±22）%，DPN组增加了（49±17）%；而ICI预处理组，与E2组相比，E2上调CBS蛋白表达作用被抑制（##P＜0.01vs.E2），蛋白表达减少了（32±8）%。 提示雌激素受体ERα、ERβ介导E2上调MCF-7细胞中CBS蛋白表达。 3.2、NF-κB通路介导E2上调MCF-7细胞中CBS蛋白表达 为筛选出介导E2上调MCF-7细胞中CBS蛋白表达相关的信号通路，分别使用MAPK抑制剂PD98059（PD，5μM）、PI3K抑制剂LY294002（LY，1μM）、NF-κB抑制剂PDTC（5μM）、SP1抑制剂MA（1μM），预处理MCF-7细胞30min后，加入E2（10-8M）处理24h，免疫印迹法检测CBS蛋白表达情况。结果显示：PDTC预处理细胞后，与E2组相比，CBS蛋白表达降低（#P＜0.05vs.E2），降低了（52±8）%；而PD、LY、MA预处理细胞后，与E2组相比，CBS蛋白表达无明显统计学差异（P＞0.05）。 提示NF-κB通路介导E2上调MCF-7细胞中CBS蛋白表达。 3.3、E2对p65蛋白磷酸化的影响 为明确E2对NF-κB活性的影响，使用E2（10-8M）分别处理MCF-7细胞0、15、30、60、120、180min后，免疫印迹法检测p65蛋白磷酸化情况。结果显示：与con组相比，E2（10-8M）处理60min，p65蛋白磷酸化增多（*P＜0.05vs.con），增加了（48±28）%；且E2的作用持续到180min（*P＜0.05vs.con，**P<0.01vs.con），p-p65蛋白表达分别增加了（48±21）%、（65±19）%；E2处理对p65总蛋白表达并无影响。 提示E2促进p65蛋白磷酸化，不影响p65总蛋白表达。 3.4、沉默p65对E2上调MCF-7细胞中CBS蛋白表达和H2S水平的影响 为明确p65的作用，转染scrambled siRNA（20nM）或p65siRNA（20nM）24h后，加入E2（10-8M）处理24h，免疫印迹法检测MCF-7细胞中CBS蛋白表达情况。结果显示：转染p65siRNA沉默p65蛋白表达后，与E2组相比，E2的作用受到明显抑制（##P＜0.01vs.scrambled siRNA+E2），CBS蛋白表达减少了（30±6）%。 同上处理后，自由基电极检测H2S水平。结果显示：转染p65siRNA沉默p65蛋白表达后，与E2组相比，E2增加H2S水平的作用受到明显抑制（##P＜0.01vs.scrambled siRNA+E2），H2S水平降低了（34±11）%。 提示转染p65siRNA后，E2上调MCF-7细胞中CBS蛋白表达、增加H2S水平的作用受到明显抑制。 结论： 1.E2上调CBS蛋白表达，增加H2S水平，进而促进MCF-7乳腺癌细胞的迁移。 2.E2通过ERα、ERβ激活NF-κB/p65信号通路。