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目的:淀粉酶是重要的工业用酶,已被广泛应用于食品、洗涤、制药等行业。由于低温淀粉酶在低温下具有高催化活性且对热敏感等特点,使其在生物工程领域及节约能源方面有着广泛的应用前景。低温淀粉酶一般是由低温微生物产生的,因而对于产低温淀粉酶菌株的筛选是解决低温淀粉酶来源的首要且基础的问题。冻土被称为低温微生物的资源宝库,因此从天山冻土中分离、纯化低温微生物对于筛选出优质、高活力的产低温酶菌株意义重大。
方法:本研究依托新疆独特的地理环境,从天山一号冰川冻土中分离、纯化出产低温淀粉酶的菌株,以解决低温淀粉酶的来源问题。对筛选出的菌株所产低温淀粉酶的酶学性质及菌株实验室发酵条件进行研究,进一步了解低温淀粉酶的性质,为低温淀粉酶的基础研究和工业化应用奠定一定的理论和实践基础。
结论:
①通过常规的稀释平板法,从天山一号冰川冰层含冰冻土中筛选出产低温淀粉酶菌株三株,分别编号为L10-1、M12-1、X2。菌株生理生化实验和产酶菌株的系统发育进化树表明:菌株M12-1、X2与Paenibacillus polymyxa的亲缘关系最近,相似性为99%;菌株L10-1与Hymenobacter.sp的亲缘关系最近,相似性只有96%,说明菌株L10-1可能为Hymenobacter属细菌,暂时隶属于该属,有待后续做进一步鉴定。
②通过对比三株菌株最适生长温度、酶最适作用温度及菌株平均直径与透明圈大小比值,确定L10-1为产酶的目标菌株,其相对酶活达到了28.2U/mL。该菌最适生长温度区间为18~24℃,属耐冷菌范畴;其产淀粉酶的最适作用温度为35℃,较同工酶的最适作用温度低25~30℃左右(中温淀粉酶最适作用温度在60~65℃)
③对菌株产酶的酶学性质的研究表明:菌株L10-1产生的淀粉酶为胞外酶,其最适作用温度为35℃;最适作用pH值为6.0;该酶的热稳定性较差,30℃和40℃保温30min后分别保持了60%和20%的活性,在60℃保温20min后几乎测不出酶活性;Ca2+、Mg2+、K+、Mn2+、Na+。对该酶有不同程度的激活作用,Co2+、Cu2+、Zn2+对该酶有明显的抑制作用;苯甲基磺酰氟化物(PMSF)、乙二胺四乙酸(EDTA)、十二烷基硫酸钠(SDS)对该酶有明显的抑制作用,表明该酶为典型的金属激活酶,而其活性中心可能存在丝氨酸(serine)基团。
④菌株L10-1产酶的实验室最佳发酵条件为:1%蔗糖(碳源),1.5%酪蛋白水解物(氮源),500ml三角瓶培养基装填量为250ml,摇床转速为200r/min,培养36h后酶活力由15.23U/mL提高到29.13U/mL。以上结论与国内外相关研究较为类似,表明该酶具有一定开发应用潜力。