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目的GFRa1在多种肿瘤中表达上调,已知在胃癌组织中GFRa1存在去甲基化激活,促进胃癌的发生和转移,缩短患者的总生存时间。本研究在食管癌和结肠癌组织中分析GFRa1去甲基化情况与肿瘤转移和患者预后的相关性,为GFRa1去甲基化可能成为预测肿瘤转移和预后的标志物提供理论依据。方法挑选食管癌患者石蜡包埋标本90例(淋巴结转移组42例,非转移组48例),结肠正常组织15例及结肠癌患者新鲜组织93例(淋巴结转移组49例,非转移组44例),收集患者临床病理资料及至少3年的随访记录。酚氯仿法提取食管癌和结肠癌组织DNA,进行亚硫酸氢钠修饰;Methy Light法和DHPLC法检测食管癌及结肠癌组织中GFRa1去甲基化情况;RT-PCR检测组织中GFRa1 m RNA表达水平;Werstern Blot检测结肠组织中GFRa1蛋白表达水平。培养人结肠癌细胞系HCT116,将实验室前期构建好的GFRa1表达载体GFRa1b-pc DNA3.1 B瞬时转染至细胞中,用长时间活细胞动态监测仪观察GFRa1b对肿瘤细胞生长能力的影响。利用SPSS17.0软件进行统计学处理,对GFRa1去甲基化情况与食管癌及结肠癌患者的术后总生存时间进行Kaplan-Meier分析,明确GFRa1去甲基化情况与肿瘤患者预后是否相关。结果一、GFRa1去甲基化激活与食管癌患者转移及预后的相关性研究1.转移组GFRa1去甲基化阳性率(78.57%)显著高于非转移组(41.67%),差异有统计学意义(P<0.05)。2.GFRa1去甲基化阳性组m RNA相对拷贝数(0.10)显著高于去甲基化阴性组(0.02),差异有统计学意义(P<0.05)。3.低分化的癌组织中GFRa1去甲基化阳性率(70.8%)高于中高分化的癌组织(45.2%),差异有统计学意义(P<0.05)。4.GFRa1去甲基化阳性患者的术后总生存时间明显低于去甲基化阴性的患者(Log-rank test,P<0.001),3年生存率分别为25.0%和64.9%。二、GFRa1去甲基化激活与结肠癌患者发生、转移及预后的相关性研究1.正常结肠组织中GFRa1去甲基化含量(中位数41.88%)低于结肠癌组织(54.45%),差异有统计学意义(P<0.05)。2.GFRa1去甲基化阳性组m RNA相对拷贝数(0.01)显著高于去甲基化阴性组(0.0004),差异有统计学意义(P<0.05)。3.淋巴结非转移组中GFRa1去甲基化含量(88.21%)低于淋巴结转移组(91.66%),差异无统计学意义。4.低分化的癌组织中GFRa1去甲基化含量(95.46%)显著高于中高分化的癌组织(89.31%),差异有统计学意义(P<0.05)。5.去甲基化阳性组GFRa1蛋白含量高于去甲基化阴性组。三、GFRa1b对肿瘤细胞生长的影响1.构建GFRa1b的表达载体,转染结肠癌细胞系HCT116细胞24小时后,细胞增殖能力显著增强。结论原癌基因GFRa1去甲基化激活可促进哈萨克族食管癌患者肿瘤淋巴结转移,并且缩短患者的术后生存时间;GFRa1去甲基化激活与结肠癌的发生正相关,过表达GFRa1b明显促进肿瘤细胞的生长。