一种新的Th2高表达蛋白——嗜中性颗粒蛋白(NGP)的表达、纯化及其性质与功能初探

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CD4~+T细胞根据其所分泌的细胞因子的不同,可以分成两个亚类:Th1细胞和Th2细胞。Th1细胞主要分泌INF-γ、IL-2、TNF-α和TNF-β,对于细胞内病原体例如单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)和利什曼原虫(Leishmania major)的清除十分重要;而Th2细胞主要分泌IL-4、IL-13、IL-5、IL-6、IL-10和IL-9,从而诱导体液反应去清除肠内蠕虫和线虫等寄生虫。体内Th1和Th2的平衡在维护机体免疫状态平衡、调节生理机能、防御感染、监视肿瘤等多方面具有重要的意义。若朝向Th1分化的细胞过量,将导致自身免疫性疾病的发生;反之,若Th2过于活跃,则会导致过敏和哮喘的发生。尽管近几年人们对辅助性T细胞分化的认识有了很大的提高,但仍然存在一些问题。我们实验室应用高通量基因芯片技术对Th1和Th2的基因表达谱进行了研究,结果发现了一种新的Th2高表达基因——嗜中性颗粒蛋白(NGP)基因;并且通过RT—PCR、实时定量PCR进一步确认NGP的确在Th2细胞中的高表达。由此推断NGP可能在辅助性T细胞的分化中发挥某种功能。将NGP克隆入质粒pEGFP-N1后,利用激光共聚焦荧光显微镜技术,发现融合表达的NGP—GFP定位于细胞质中,并且转染了NGP-pEGFP-N1的293T细胞的上清液可以抑制OVA诱导的小鼠脾细胞的增殖。为了进一步对NGP进行功能研究,表达纯化了NGP-GST融合蛋白,同时制备了抗体。经过westernblot验证,在蛋白水平上也证实NGP是在Th2中高表达。由此,可以初步断定NGP为Th2分泌的一种新的细胞因子。进一步对纯化的NGP-GST蛋白进行功能研究表明,所纯化的融合蛋白同样可以抑制OVA诱导的小鼠脾细胞增殖。综上所述,本研究可能发现了Th2分泌的一种新的细胞因子。这种细胞因子具有抑制特异性抗原所引起的脾细胞增殖的功能。
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