论文部分内容阅读
目的研究罗格列酮与替米沙坦单独或联合用药对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahy-dropyridine,MPTP)所致帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型小鼠黑质中酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)、离子钙接头分子-1抗体(Ionized calcium binding adapter molecule1,iba-1)、p47-phox、诱导型一氧化氮合酶(Inducible Nitric Oxide Synthase,i NOS)表达的影响,以探讨罗格列酮联合替米沙坦对多巴胺能神经元的保护作用及其可能机制。方法健康雄性C57BL/6N小鼠75只,随机分为5组,每组15只。分别为模型组、替米沙坦组、罗格列酮组、联合用药组和空白对照组。模型组:小鼠每天腹腔注射MPTP(25mg/kg,生理盐水溶解)1次,连续7d;替米沙坦组:每天在MPTP注射前4h给予小鼠替米沙坦灌胃预处理(40mg/kg)1次,连续7d;罗格列酮组:每天在MPTP注射前4h给予小鼠替米沙坦灌胃预处理(4mg/kg)1次,连续7d;联合用药组:每天在MPTP注射前4h给予小鼠一半计量的药物即替米沙坦(20 mg/kg)和罗格列酮(2 mg/kg)灌胃预处理1次,连续7d;对照组:腹腔注射与模型组等量的生理盐水,每天一次,连续7d。各组小鼠在最后一次注射后12h取材。采用免疫组织化学法观察各组小鼠黑质区酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数量,黑质区p47-phox、i NOS免疫反应阳性细胞数量变化,采用免疫蛋白印迹法检测中脑黑质区TH、iba-1、p47-phox、i NOS表达水平的变化。采用免疫荧光双标记发观察iba-1、p47-phox、i NOS与TH的共定位情况。采用计算机图像分析法对免疫组化染色阳性细胞数量和免疫蛋白印迹条带进行光密度分析。所有数据采用SPSS13.0统计分析软件进行统计学处理。结果与对照组小鼠相比,模型组小鼠表现出典型PD症状。黑质区TH阳性神经元显著大量丢失,蛋白水平亦下降。黑质区iba-1、p47-phox、i NOS阳性细胞显著增加,蛋白水平亦升高;与模型组相比,罗格列酮组小鼠PD症状减轻,TH阳性细胞数与对照组相比有所下降约35%,蛋白水平下降有所减轻。黑质区iba-1、p47-phox、i NOS阳性细胞有所减少,蛋白水平有所下降;与模型组相比,替米沙坦组小鼠PD症状减轻,TH阳性细胞数与对照组相比有所下降约35%,蛋白水平下降有所减轻。黑质区iba-1、p47-phox、i NOS阳性细胞有所减少,蛋白水平有所下降;与模型组相比,联合用药组小鼠PD症状减轻明显,TH阳性细胞数与对照组相比仅下降约20%,蛋白水平下降明显减轻。黑质区iba-1、p47-phox、i NOS阳性细胞明显减少,蛋白水平有显著的下降。结论罗格列酮联合替米沙坦通过抑制PD小鼠模型中脑黑质iba-1、i NOS和p47的表达,对DA能神经元起到一定的保护作用,且效果优于单独用药。