过表达TGF-β/Smad信号转导通路中Smad7蛋白对瘢痕疙瘩成纤维细胞的影响研究

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:iamwoceo
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[目的]构建Smad7基因过表达载体后转染瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KFb),通过观察细胞内Smad7、Ⅰ、Ⅲ型胶原基因和蛋白表达变化情况和细胞增殖能力的变化情况,探讨过表达Smad7基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞的影响。[方法]选择昆明医科大学第二附属医院整形外科10例男性瘢痕疙瘩患者手术切下的瘢痕疙瘩组织为实验标本(经患者同意),无菌条件下采用组织块贴壁培养法在体外培养KFb。将培养的细胞分为3组,A组为未转染组;B组为空载体pcDNA3.1(-)转染细胞组;C组为Smad7基因过表达载体pcDNA3.1(-)-smad7转染细胞组。转染48h后,采用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测各组细胞内Smad7、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原基因转录和蛋白表达水平,分别于转染24h、48h、72h后MTT法检测各组细胞增殖能力。[结果]C组Smad7mRNA和蛋白相对表达量显著高于A、B组,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白相对表达量显著低于A、B组,差异均有统计学意义(P<0.01);B组Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA相对表达量高于A组(P<0.01),Smad7、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白相对表达量低于A组(P<0.01)。MTT检测示,培养各时间点C组细胞增殖能力均小于A、B组(P<0.05),A、B组间差异均无统计学意义(P>0.05)。[结论]Smad7基因过表达载体转染至KFb后,能抑制KFb Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原基因的表达和细胞增殖能力。
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