Migfilin是LIM结构域家族成员,主要位于胞浆中,介导蛋白之间的相互作用,参与局部黏附和细胞骨架之间的联系,从而影响细胞的形态和运动能力。Migfilin还可通过RNA剪切和钙离子激活的方式进入细胞核内,参与相关基因的转录调控。通过免疫组织化学的方法发现migfilin在食管癌和正常组织中存在表达差异,采用Western blot的方法进一步在蛋白水平上验证了这一结果。此外,经实时定量PCR的方法还发现,migfilin的表达与食管癌淋巴结转移呈现负相关的关系,这表明migfilin的表达可能与食管癌的远处转移和恶性转化相关。为了研究migfilin在食管癌中的功能,我们将migfilin真核表达质粒转染至migfilin低表达的食管癌细胞系KYSE450中并建立了稳定高表达migfilin的KYSE450亚克隆细胞。功能研究表明,migfilin过表达不影响细胞的增殖、凋亡和细胞周期的运转,但可促进细胞与胞外基质成分Fibronectin之间的黏附,并可抑制细胞的穿膜能力以及细胞对基质的侵袭能力。免疫荧光显示,migfilin过表达的细胞极性减弱,伪足增多。此外,应用siRNA在migfilin高表达的食管癌细胞系KYSE150细胞中敲降migfilin的表达,发现migfilin的表达被干扰后细胞侵袭和迁移运动能力增强。为进一步揭示migfilin引起细胞黏附、运动和形态改变的分子机理,我们检测了migfilin的表达改变对与细胞黏附和细胞骨架结构密切相关的一系列分子的影响。结果发现在migfilin过表达的细胞中β-catenin的表达下调,同时在293T细胞中瞬时转染migfilin抑制了β-catenin的转录活性。经进一步研究显示migfilin过表达所引起的β-catenin表达下调与其被GSK-3β磷酸化及随后的泛素化-蛋白酶降解相关。Migfilin通过促进GSK3β与β-catenin的相互作用,从而增强了GSK3β对β-catenin的磷酸化,磷酸化后的β-catenin将易于被E3泛素连接酶β-TrCP所识别,进入泛素化-蛋白酶降解途径。敲降migfilin,表达GSK3β磷酸化位点突变的β-catenin,加入GSK3β抑制剂LiCl或蛋白酶抑制剂MG132能使胞浆β-catenin表达上升,并恢复其转录活性,说明migfilin是通过GSK3β和蛋白酶途径来调节β-catenin的蛋白稳定性的。此外,migfilin还可以通过抑制PI3K/Akt通路来上调GSK3p的酶活性,从而降低β-catenin的蛋白表达。而加入PI3K的抑制剂LY294002,则完全废除了敲降migfilin所引起的PI3K/Akt通路上的相关信号分子的激活。在migfilin过表达的稳定克隆中恢复β-catenin的表达能部分恢复细胞的侵袭能力,说明migfilin对细胞活动能力的影响至少部分是由于migfilin引起的β-catenin的蛋白降解所介导的。综上所述,我们认为migfilin应该是通过影响食管癌细胞的黏附形成、骨架结构、侵袭和迁移能力在食管癌的侵袭转移过程中发挥一定的功能。