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磺胺类药物是兽医临床上使用最广的一类化学合成抗菌药，主要用于细菌感染性疾病和某些原虫病的预防和治疗。但使用不合理很容易造成组织中的残留和蓄积。许多国家和组织规定了其最高残留限量（MRLs）为0.1μg/g，甚至不得检出。高效液相色谱、气-质联用等是磺胺类药物残留检测的法定方法，但成本较高，方法繁琐，不适于大量样本的测定。酶联免疫法（ELISA）检测具有特异性强、灵敏度好且适合大批样本快速测定的特点，在兽药残留检测上的应用日益广泛。关于各磺胺类药物残留免疫法检测的研究已有较多报道，但关于磺胺类药多残留（multi-residues）检测的研究才刚刚起步，而且在理论和实践中有许多问题需要解决。本研究通过化学法合成了两种具有磺胺母核结构的半抗原，制备了对多种磺胺药具有敏感性的多克隆抗体，并对多残留免疫分析的基本规律进行了探讨。另外，研制了磺胺甲基异噁唑（SMZ）抗体，建立了SMZ的ELISA检测方法，并应用于牛奶中SMZ残留的检测。 用对乙酰氨基苯磺酰氯（ASC）和对氨基苯甲酸（PABA）为反应原料，经过亲核取代、水解等化学反应，合成了保留磺胺药母核结构的半抗原化合物H1、H2，经紫外扫描、红外光谱、质谱、核磁共振以及免疫法鉴定为预期产物。用活性酯法和混合酸酐法将半抗原与载体蛋白偶联，制备了人工抗原，两种免疫原H1-HSA、H1-BSA的结合比分别为10.3：1和9.6：1。 用H1-HSA偶联物免疫兔子，制备了抗磺胺类药物抗体，抗体效价在1：10万以上。间接竞争ELISA表明，5种常用的磺胺药SO、SMM、SMD、SMZ、SC的检测限分别为0.065、0.046、0.045、0.032、0.015μg／ml，低于最高残留限量0.1μg/ml。但SD、SM2的检测限较高为0.86、1.0μg/ml。抗体有较高的特异性，常用的4种抗生素和3种磺胺类药结构类似物与抗体无交叉反应，制备了酶标半抗原，并进行了直接竞争ELISA试验。试验结果表明磺胺药N1端R取代基的空间位阻、电子云和电荷的分布与密度是决定抗体识别药物的重要因素。在牛奶介质中各药物的检测效果优于PBS介质中，添加SO的回收率为76.5％～107.4％，建立的间接竞争ELISA法基本能满足磺胺药多残留定性检测的要求。 用戊二醛将SMZ与载体偶联，以SMZ-BSA为免疫原制备了多克隆抗体和单克隆抗体。多克隆抗体具有较高的检测灵敏度和特异性，以其建立了测定SMZ残留的间接竞争ELISA方法。以SMZ浓度的对数为横坐标，药物对抗原抗体反应的抑制率为纵坐标，绘制了标准曲线。经计算，该方法的检测限是8.74ng／ml，定量限为71.46ng/ml，低于最高残留限量100ng／ml，抗体与其它6种磺胺药的交叉反应＜0.1％。比较了两种ELISA反应模式进行，发现抗体各作用40分钟时检测限没有降低。在牛奶介质中检测的灵敏度更高，检测限为6.14ng/ml，定量限25.4ng/ml，IC50值为398ng／ml，添加回收率为71.6％～106％，RSD4.5％～10.27％，符合残留检测的要求，可用于SMZ残留测定。