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杜香(Ledum palustre L.var.Angustum E.Busc)为杜鹃花科(Ericaceae)杜香属(Ledum)灌木,又名细叶杜香或狭叶杜香,主产于北半球的温带和寒温带,其中中国黑龙江大、小兴安岭资源丰富,其性寒,味辛、苦,具有止咳、化痰和平喘的功效。但是,目前对杜香的药效物质基础和作用机理等基础研究尚不够深入,本研究对采自大兴安岭地区的杜香治疗急性支气管炎的药理作用进行研究,确定了其有效部位,进一步研究明确了该有效部位的药效物质基础,并采用一测多评法测定了杜香中4种活性成分的含量。具体研究如下:1.杜香提取物不同部位治疗急性支气管炎的药理学研究。采用系统溶剂萃取法,制备杜香石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水组分。通过小鼠止咳祛痰的药效实验,确定了杜香治疗急性支气管炎的有效部位为正丁醇和乙酸乙酯组分,并考察了杜香有效部位治疗急性支气管炎的药理作用,研究结果表明正丁醇和乙酸乙酯组分能够降低细胞因子TNF-α、IL-8、IL-4的水平,并能提高细胞因子IFN-y的水平,而杜香正丁醇组分亦可降低小鼠肺组织中的Bcl-2水平,正丁醇和乙酸乙酯组分通过对上述指标的调控,发挥治疗急性支气管炎的作用。2.杜香治疗急性支气管炎有效部位的药效物质基础研究。通过硅胶、ODS等柱色谱以及制备型HPLC对杜香正丁醇组分和乙酸乙酯组分进行系统的化学成分分离,根据1H和13C-NMR谱,结合HRESI-MS质谱,共分离鉴定了 35个单体化合物,其中包括黄酮类化合物20个,分别为:narcissin(1),kaempferol-3-O-β-D-rutinoside(2),rutin(3),quercetin-3-O-γ-D-xylopyranosyl-(1→2)-γ-D-galactopy-ranoside(4),isoquercitrin(5),isorhamnetin-3-O-β-D-glucopyranoside(6),isorhamnetin-3-O-β-D-galactoside(7),quercitrin(8),hyperoside(9),pectolinarin(10),linarin(11),luteolin-7-O-β-D-glucopyranoside(12),tilianin(13),acacetin(14),Isovitexin(15),hesperidin(16),liquiritin apioside(17),4,4’-dihydroxy-dihydrochalcone-4’-O-β-D-glucopyranoside(18),licuraside(19),catechin(20);苯丙素类化合物 8 个,分别为chlorogenic acid(21),4-[(1E)-3-hydroxy-1-propen-1-yl]-2-methoxyphenyl-3-O-α-L-rhamno-pyranosyl-(1→6)-O-β-D-glucopyranoside(22),eugenyl β-rutinoside(23),coniferin(24),p-coumaric acid(25),scopoletin(26),isofraxidin-7-O-β-D-glucopyranoside(27),fraxetin(28);其他类化合物 7 个,分别为:methyl 3-hydroxy-2-phenylpropanoate(29),acetate(30),4-methylbenzene-1,2-diol(31),trans-resveratrol-3-O-β-D-glucopyranoside(32),methyl p-hydroxy benzonate(33),(1R,2S,3S,4S)-1,2,3,4-tetrahydroxy-p-menthane(34),2,4-dihydroxy-6-methoxy-acetophenone(35)。其中11个化合物为首次从该属植物中分离得到,分别为化合物 4,13,18,19,22,23,29,31,32,34,35。3.杜香药材的质量评价研究。建立了一测多评法同时测定杜香药材中4种活性成分秦皮乙素、秦皮素、金丝桃苷和2,4-二羟基-6-甲氧基乙酰苯的含量,流动相为V(甲醇):V(0.2%醋酸)=23:50,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长305nm。结果显示,秦皮乙素在4.044-101.10μg·mL-1(r=0.9998)、秦皮素在4.604-115.10 金丝桃苷在 4.280-107.00 μg·mL-1(r=0.9999)、2,4-二羟基-6-甲氧基乙酰苯在4.120-103.00 范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率(n=9)分别为103.46%、100.3%、101.8%、100.5%,其相对标准偏差RSD%分别为3.572%、3.499%、2.104%、2.752%,说明此方法操作简便、准确,具有良好的重现性,以秦皮素为内标物,测定与秦皮乙素、金丝桃苷、2,4-二羟基-6-甲氧基乙酰苯的相对校正因子,分别为0.7470,0.5146,0.4686,相对校正因子重现性良好。计算杜香中4种成分的含量,并比较一测多评法的计算值与外标法实测值的相似度,结果显示,采用校正因子计算的含量值与外标法实测值之间无显著性差异,一测多评法适用于杜香中此4种成分的含量测定。综上,本研究对杜香治疗急性支气管炎的药理作用进行研究,确定了杜香治疗急性支气管炎的有效部位,初步探讨了该有效部位治疗急性支气管炎的机理,基本阐明了药效物质基础,并建立了一测多评法测定杜香中4种活性成分的含量,从而为杜香开发成治疗急性支气管炎的新药及相应质量标准的制定奠定了基础。