1 研究目的前期基础研究发现,复方浙贝颗粒可通过调控多药耐药相关蛋白与耐药相关酶表达、诱导细胞凋亡等多途径逆转肿瘤细胞(白血病)的多药耐药性；临床研究也证实,复方浙贝颗粒联合化疗可提高难治性急性白血病临床缓解率,降低化疗相关毒性反应。基于前期研究工作基础,我们试图通过细胞与动物实验,从白血病干细胞水平探讨复方浙贝颗粒和复方中单味中药有效成分逆转白血病耐药机制。2 研究方-法2.1细胞实验部分实验内容如下：①KG-1a细胞传代培养,流式细胞术鉴定KG-1a细胞特异性表面抗原表达。②MTT法检测川芎嗪、贝母甲素、粉防己碱对KG-1a细胞增殖、细胞凋亡与特异性表面抗原、相关信号通路蛋白(PTEN、AKT、ERK1/2)表达的影响。③蛋白免疫印迹法检测川芎嗪、粉防己碱影响KG-1a细胞PTEN、 Caspase9、NF-κB蛋白表达。④实时荧光定量PCR检测川芎嗪、贝母甲素、粉防己碱影响KG-1a细胞AKT、Caspasae9、ERK、mTOR、PTEN、NF-κB基因表达。2.2动物实验部分实验内容如下：①流式细胞术检测复方浙贝颗粒联合阿霉素对KG-1a移植瘤组织特异性表面抗原表达的影响。②免疫组化法检测复方浙贝颗粒联合阿霉素对KG-1a移植瘤组织mTOR、PTEN、NF-κB、PI3K表达的影响。3 结果3.1细胞实验部分流式细胞仪检测KG-1a细胞高表达CD34、CD33、CD123、CD96,低表达CD117,具有LSC特征。与对照组比较,经药物干预KG-1a细胞48小时后发现：①川芎嗪、贝母甲素、粉防己碱能明显抑制KG-1a细胞增殖,其半数抑制浓度(IC50)分别为：103.43μg/mL、163.55μg/mL、8.69μg/mL、②川芎嗪对KG-1a细胞早期凋亡、晚期凋亡及总凋亡率无明显影响；贝母甲素能增加KG-1a细胞晚期凋亡率；粉防己碱能增加KG-1a细胞早期、晚期凋亡率。③川芎嗪能下调CD34+CD38-、CD34+CD33+、CD34+CD123+、CD33+CD123+表达率,降低CD7、CD56、CD44荧光强度；贝母甲素对CD34+CD38-、CD34+CD33+、 CD34+CD123+、CD33+CD123+、CD34+CD96+表达率无明显影响；粉防己碱可以下调CD34+CD38-、CD34+CD96+表达率,降低CD7、CD56表达率及其荧光强度。④川芎嗪对KG-1a细胞内特异性信号通路蛋白ERK1/2、PTEN、 AKT表达率以及PTEN荧光强度无明显影响,但能降低ERK1/2、AKT表达的荧光强度；贝母甲素对PTEN、AKT荧光强度及表达率、ERK1/2表达率无明显影响；粉防己碱能上调PTEN表达率。⑤川芎嗪、贝母甲素对AKT、Caspasae9、 ERK、mTOR、PTEN、NF-κB基因表达无明显影响；粉防己碱可以影响mTOR. NF-κB基因表达。3.2动物实验部分研究结果如下：①KG-1a细胞特异性表面抗原检测：与生理盐水组比较,CZBG各剂量组可降低CD34+CD38-、CD34+CD38-CD123+、CD34+CD38-CD96+、 CD34+CD38-CD33+表达率；与阿霉素组比较,CZBG中、高剂量组可降低CD34+CD38-、CD34+CD38-CD96+,高剂量组可降低CD34+CD38-CD123+、 CD34+CD38-CD33+表达率。②KG-1a细胞特异性信号通路蛋白检测：与生理盐水组比较,CZBG各组可降低mTOR、NF-κB表达光密度值；与阿霉素组比较,CZBG高剂量组可降低mTOR蛋白表达,CZBG中、高剂量组可降低NF-κB光密度值。4 结论研究结论如下：①人急性髓系白血病细胞系KG-1a细胞具有LSC样特征。②川芎嗪、贝母甲素、粉防己碱能抑制KG-1a细胞增殖；贝母甲素、粉防己碱能促进KG-1a细胞细胞凋亡。③川芎嗪、粉防已碱能降低KG-1a细胞特异性表面抗原表达,并在蛋白水平调控AKT、ERK1/2信号通路。④复方浙贝颗粒联合化疗能够抑制KG-1a移植瘤组织特异性表面抗原表达,并在蛋白水平调控AKT信号通路。