氨甲蝶呤(methotraxate，MTX)是一种临床常用化疗药物，然而在抗肿瘤治疗中，持续给药会导致细胞获得耐药性，使治疗效果不佳。在MTX抗性细胞系中存在的双微体(doubleminutes，DMs)与MTX的耐药性密切相关。DMs是基因扩增的常见细胞遗传学结构，它的存在为细胞提供了一种选择性的生长优势。为寻找DMs上携带的扩增基因以及与MTX耐药相关的蛋白质，本研究以细胞系3T3R500(来源于小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3且具有MTX抗性)、MTX300(可耐受300μmol/LMTX)和NIH3T3为研究对象，利用比较蛋白质组学的研究方法对其进行了研究。 应用双向电泳技术分离上述3种细胞系的蛋白质组成分，软件分析蛋白质组表达图谱，筛查到了6个在MTX300中表达显著高于3T3R500和NIH3T3的蛋白质点，将其胶内酶切后利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)成功了鉴定其中的2个蛋白质，分别为二氢叶酸还原酶(dihydrofolatereductase，DHFR)和αβ-晶体蛋白(αβ-crystallin)，并利用Westernblot对二者的表达情况进行了进一步的验证。 以上结果提示DHFR和αβ-晶体蛋白与MTX的耐药密切相关。已有大量研究表明在MTX抗性细胞系中存在的DMs上携带有扩增的DHFR基因，并且DHFR基因的扩增导致蛋白量的增高是重要的MTX耐药机制之一。本研究从蛋白质组学这样一个全新的角度对其进行了进一步的印证。目前仍未见αβ-晶体蛋白与MTX耐药关系的相关报道，同时，αβ-晶体蛋白的过表达是否由于其编码基因CRYAB以DMs为载体得到了扩增而导致其蛋白产物表达量的增高也有待进一步的研究。