miR-276-3p在长角血蜱中的表达分析及功能的初步探究

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蜱作为节肢动物中仅次于蚊子的第二大传播媒介,是一种专性吸血且能够传播病毒、血液原虫及细菌等多种病原体的外寄生虫。长角血蜱属于硬蜱科血蜱属,广泛分布于全球多个国家,作为我国的优势蜱种之一,长角血蜱在我国山西等17个省份大量分布。长角血蜱传播的东方泰勒虫及卵形巴贝斯虫对畜牧业的发展造成了巨大影响,而其传播的SFTSV病毒能够引起人发热伴血小板减少综合征,该病的高致死率严重危害到人类的健康。miRNA是一段大小约为22个核苷酸(nt)的非编码单链小分子RNA,主要在转录后水平通过与靶基因相互作用而发挥功能,miRNA可以调控体内30%~90%的基因,参与调控包括生长发育、肿瘤发生、免疫应答、胰岛素分泌、神经递质合成和昼夜节律等多种生物学功能。因此,研究miRNA在长角血蜱中发挥的调控功能,有助于了解其生长发育,并为疫病传递机制的探究奠定可靠的分子学基础,为蜱传播疾病的防控提供一定的参考数据。本试验通过筛选长角血蜱miRNA高通量数据库,获得了一个可能与长角血蜱生长发育相关的miR-276-3p,然后通过体外扩增验证了miR-276-3p在长角血蜱体内真实存在,相对荧光定量检测其在长角血蜱的卵、卵巢及中肠的表达丰度均较高,推测miR-276-3p可能与蜱的生长发育相关。通过miR-276-3p的干扰试验表明,miR-276-3p antagomir成功抑制了miR-276-3p在长角血蜱体内的表达,对长角血蜱的饱血时长、产卵时长、饱血体重及卵重进行统计,结果表明饱血时长和产卵时长较对照组无明显变化,但饱血体重及卵重较对照组显著降低,证实miR-276-3p能够影响饱血成蜱的饱血体重及卵重。利用RNAhybrid 2.1预测得知e EF2是miR-276-3p的一个靶基因。通过体外扩增验证e EF2在长角血蜱体内真实存在,相对荧光定量检测结果表明,e EF2在卵、卵巢、马氏管及中肠的表达丰度较高,且e EF2在饱血蜱中的表达丰度均低于相应饥饿蜱,推测e EF2有可能与长角血蜱产卵或者吸血相关。双荧光素酶报告系统结果进一步证实e EF2是miR-276-3p的一个靶基因;RNAi试验结果表明,e EF2的抑制对长角血蜱吸血时长及产卵时长没有影响,但能够造成长角血蜱饱血成蜱饱血体重及卵重的下降。总之,本研究结果表明,miR-276-3p能与其靶基因e EF2相互作用,并在长角血蜱的生长发育中发挥重要的调控功能。
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