论文部分内容阅读
目的：采用尾静脉注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)建立大鼠急性肺损伤(actue lung injury,ALI)模型,了解该模型肺组织匀浆中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达水平以及OPN对脂多糖致大鼠急性肺损伤血清中TNF-α、IL-10、IFN-y和IL-4表达水平的影响,从而探讨OPN在脂多糖致大鼠急性肺损伤中所处的地位与作用。方法：1.将56只无特定病原体级雄性SD(Sprague Dawley)大鼠,平均体重(200±10)g,按随机数字表分为对照组8只、ALI组24只、干预组24只,其中ALI组和干预组2h、4h、8h各8只。用生理盐水1ml经尾静脉注入,5分钟后再尾静脉注人生理盐水0.5ml／kg建立对照组；用LPS 6mg/kg加生理盐水至1ml经尾静脉注入,5分钟后再经尾静脉注人生理盐水0.5ml／kg建立大鼠ALI组；用LPS 6mg/kg并加生理盐水至lml经尾静脉注入,5分钟后再经尾静脉注射浓度为1：32的Anti-OPN-Ab 0.5ml/kg(参考文献Anti-OPN-Ab按1：32效价比用抗体稀释液稀释并每kg大鼠体重0.5ml应用)建立干预组；以上各组大鼠分别于2小时、4小时及8小时各处死8只。2.利用动脉血Pa02测定、肺湿重／干重比(wet/dry, W/D)测定、病理组织学检查及肺损伤的评分等比较各组肺损伤的程度,并评价ALI模型的建立。3.酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组血清TNF-α、IL-10、IFN-γ和IL-4含量。4.免疫印迹法(Western blotting)检测各组肺组织匀浆中OPN表达水平,用OPN/β-actin(光密度比值)表示。结果：1.ALI组及干预组肺与NC组相比：肺湿重／干重比值、肺损伤评分、血清TNF-a浓度、血清IFN-y浓度、血清IL-10浓度、血清IL-4浓度、TNF-a/IL-10比值、IFN-y/IL-4比值及肺组织匀浆OPN表达均显著升高(P均<0.05),动脉血Pa02却明显降低；2.ALI组的肺W／D比值、肺损伤评分、血清IFN-y浓度、血清IL-10浓度、血清IL-4浓度、TNF-a/IL-10比值、IFN-y/IL-4比值及肺组织匀浆OPN表达在4小时显著高于2小时及8小时(P均<0.05),但血清TNF-a浓度2小时升高最明显(P均<0.05)；3.干预组肺W／D比值、肺损伤评分、血清TNF-a浓度、血清IFN-y浓度、TNF-a/IL-10比值及IFN-y/IL-4比值均显著性降低(P均<0.05)；动脉血Pa02、血清IL-10浓度及血清IL-4浓度均显著性升高(P均<0.05)；肺组织匀浆OPN表达却无显著性降低(P均>0.05)。结论：1.尾静脉注射LPS能成功诱导大鼠ALI模型,4h时肺损伤最为明显和典型。2.OPN在LPS致大鼠ALI肺组织中表达明显增加。鼠ALI发生发展中起着重要作用。4.OPN可能通过升高血清TNF-α、IFN-γ表达水平及降低血清IL-10、IL-4表达水平加重LPS致大鼠ALI。