小鼠胚胎发育时期脑内SP和SPR的定位

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【背景和目的】 P物质(SP)广泛分布于中枢神经系统和外周神经系统中,是由中枢和外周初级传入神经末梢释放的一种神经递质。哺乳动物的SP由前速激肽原(Preprotachykinin,PPT)A基因编码。PPT—A基因同样编码其他速激肽如neurokinin A,neuropeptide B等。速激肽受体也被分为速激肽NK1受体,速激肽NK2受体,速激肽NK3受体。速激肽NK1受体与SP有着最强亲和力,即P物质受体(SPR)。SP与SPR特异结合后使受体内化,通过激活磷脂酶C(PLC)并水解磷酸肌醇(PIP2) 生成三磷酸肌醇(IP3)和二酯酰甘油(DAG)两种第二信使发挥生物学效应。 已有的实验发现在小鼠胚胎时期脑内已有SP表达,但其与中枢神经系统发育的关系仍不清楚,而且关于SPR在小鼠胚胎时期脑发育过程中的表达也未见报道,因此调查SP与SPR在小鼠胚胎时期脑的分布情况及其相互间关系,可以为进一步研究SP在中枢神经系统发育阶段所起的作用提供形态学依据。本研究采用免疫组织化学染色方法结合western blotting半定量方法,使用特异性SP和SPR抗体,观察SP和SPR在小鼠胚胎发育时期脑内表达的变化,推测胚胎发育阶段SP在中枢神经系统中所起的作用。 【材料与方法】 1.实验动物及组织切片制备 分别取E11(胚胎11天),E13,E15,E17,E19和P0(新生)ICR品系小鼠脑经冠状切面进行连续冰冻切片。 2.酶标免疫组织化学 将冰冻切片分别滴加兔抗SP多克隆抗体和抗SPR多克隆抗体,生物素标记的羊抗兔IgG,加入抗生物素蛋白—辣根过氧化物酶复合物,二甲基联苯胺呈色观察。
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