补阳还五汤为临床治疗缺血性脑中风的常用古方,由黄芪、当归、川芎、赤芍、桃仁、红花、地龙七味药材组成,本方具有益气、活血通络之功效。本研究运用指纹图谱及血小板细胞膜固相色谱法对补阳还五汤的“行血”药效物质基础进行探索研究,为进一步探索确定补阳还五汤药效作用的确切成分及其剂型开发奠定基础。目的:在建立补阳还五汤及其注射液的HPLC指纹图谱,以及代表化学成分检测方法的基础上,利用血小板细胞膜固相色谱法筛选活性成分,以探讨其“行血”药效物质基础。方法:1.以依利特HyperilODS2(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱,甲醇-0.1%乙酸水为流动相,梯度洗脱,建立250nm波长下补阳还五汤及其注射液的指纹图谱,并利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”对10批补阳还五汤相似度进行研究。2.以依利特Hyperil ODS2(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱,乙腈-0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱,对补阳还五汤中的苦杏仁苷、芍药苷、毛蕊异黄酮苷及阿魏酸进行含量测定;在指纹图谱色谱条件下,对补阳还五汤注射液中的芍药苷及毛蕊异黄酮苷进行含量测定。3.通过补阳还五汤与血小板悬液的结合与解离,建立血小板细胞膜固相色谱法,对补阳还五汤注射液中的“行血”成分进行研究。4.通过对比补阳还五汤、注射液、解离液、单味药材及其阴性样品的HPLC指纹图谱,首次对其中的色谱峰归属进行了相关探索研究。结果:1.建立了补阳还五汤及其注射液的指纹图谱,分别得到14、13个共有峰,10批补阳还五汤及其注射液相似度大于0.9,较现有研究指纹图谱方法更稳定、重复性、专属性良好;2.补阳还五汤中3批样品中的苦杏仁苷、芍药苷、毛蕊异黄酮苷及阿魏酸在总方中的含量分别为:1.081～1.095,2.088～2.100,0.2108～0.2122,0.08672～0.09006 mg/g;补阳还五汤注射液中芍药苷、毛蕊异黄酮苷在总方中的含量分别为:793.51～868.91,43.19～50.88μg/g;3.利用血小板悬液与补阳还五汤注射液结合,洗脱未结合成分的方法建立了血小板固相色谱法,获得含有5个色谱峰的解离液,该方法重现性良好(RSD<5.00%)。4.相关性研究结果表明,补阳还五汤指纹图谱中指纹图谱中4、10、12、13号色谱峰来自黄芪,6、7、8号色谱峰来自赤芍,3、4、9号色谱峰来自川芎,5、9、11号色谱峰来自当归,6号色谱峰来自红花。补阳还五汤注射液指纹图谱中6、12号峰来自黄芪;8、10号峰来自赤芍;5、9、11号峰来自川芎;7、11号峰来自当归;8号峰来自桃仁。通过比较补阳还五汤提取物与注射液的图谱,确定了补阳还五汤注射液中的5、6、7、10、12号色谱峰分别对应补阳还五汤提取液中的3、4、5、8、10号色谱峰。血小板解离液指纹图谱中含有5个色谱峰,单味药材与血小板解离液HPLC指纹图谱相关性研究表明,1号峰来自桃仁;2号峰来自赤芍;3号峰来自当归、川芎;4号峰来自黄芪。通过对照品对解离液进行定性分析,结果表明,2号峰为芍药苷,4号峰为毛蕊异黄酮苷。解离液中得到的5个色谱峰成分可能为补阳还五汤抗血栓,活血化瘀的物质基础。结论:建立补阳还五汤及其注射液指纹图谱和含量检测方法;对补阳还五汤及注射液、解离液进行了峰相关性研究,找到了色谱峰中药材来源,利用血小板固相色谱法筛选出的芍药苷、毛蕊异黄酮苷及其他3种成分,可能为补阳还五汤抗血栓、抗血小板聚集的“行血”活性成分。