论文部分内容阅读
毛尖紫萼藓(Grimmia pilifera P. Beauv. Prodr.)属紫萼藓科(Grimmiaceae),紫萼藓属(Grimmia),小型旱生藓类,具有很强的耐旱特性。本研究以毛尖紫萼藓配子体为材料,利用组织培养的方法,借助旋流振荡器,对外植体消毒。对研究所使用的消毒液的种类、浓度以及消毒时间进行探索,并成功地得到了无菌的原丝体。对原丝体的培养条件进行了优化,筛选出了适合毛尖紫萼藓原丝体生长的培养基类型、培养基中NH4NO3浓度、糖源种类及浓度、温度、光照、pH值、激素的种类及浓度。在此基础上,对原丝体进行了诱导并成功得到了再生配子体。本研究主要结果如下:(1)毛尖紫萼藓配子体材料通过十五天左右的预培养,预处理,取茎尖部约5mm幼芽,流水冲洗5h。0.025%升汞溶液,借助旋流振荡器,剧烈振荡105s,无菌水冲洗,能有效的进行消毒处理。(2)Beneck培养基适合消毒后的毛尖紫萼藓外植体(配子体)返绿生长。(3)Prat培养基适合毛尖紫萼藓原丝体生长。Beneck培养基适合毛尖紫萼藓原丝体横向分散生长,但原丝体长度较短。Knop培养基不适合毛尖紫萼藓原丝体生长,接在Knop培养上的原丝体发黑,死亡。(4)Prat培养基中,NH4NO3浓度为500mg/L时,最利于原丝体的生长。(5)蔗糖在一定范围内对原丝体在MS培养基生长影响较小;添加了蔗糖、果糖、葡萄糖的Prat培养基以及Beneck均不适合毛尖紫萼藓原丝体生长,原丝体发黑,死亡;(6)当温度为(15±1)℃或(19±1)℃时,毛尖紫萼藓原丝体生长缓慢;(23±1)℃适合毛尖紫萼藓原丝体生长以及配子体再生;(27±1)℃时,毛尖紫萼藓原丝体褐化严重,原丝体发黑,不适合原丝体生长。(7)光照强度3000lx、光照周期12h/12h适合毛尖紫萼藓原丝体生长;黑暗条件下,毛尖紫萼藓原丝体死亡;全光照条件下,毛尖紫萼藓褐化严重,最终死亡。(8)pH为5.5时的Prat培养基最适合毛尖紫萼藓原丝体生长;pH为6.0时的Beneck培养适合毛尖紫萼藓扩展生长。(9)NAA(1mg/L)不适合毛尖紫萼藓原丝体生长;KT、6-BA、2、4-D、IBA、IAA对毛尖紫萼藓原丝体生长有一定的促进作用,但各激素之间对原丝体生长作用差异不显著。当激素的浓度改变为0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L时,原丝体生长变化不明显,在一定范围内,激素浓度对于原丝体生长影响不大。(10)生长状态较旺盛的原丝体有利于新配子体的生成。(11)添加30g/L葡萄糖的MS培养基能诱导出配子体,但配子体非常弱小,生长状态极差。(12)将褐化的发黄的原丝体以及有假根生长的原丝体继代于pH为5.5的Prat培养基上,20天左右就可以长出新的配子体,配子体生长状态良好。(13)NH4NO3浓度对配子体再生有重要作用,Prat培养基能诱导出毛尖紫萼藓新生配子体,改良的Prat(NH4NO3浓度从原来的2.5g/L改为0.5g/L)不能诱导出新生配子体。(14)一定浓度的激素(2,4-D和6-BA)配比对毛尖紫萼藓配子体诱导效果不佳,2,4-D1mg/L+6-BA2mg/L+Prat培养基能够诱诱导出弱小的新生配子体;2,4-D1mg/L+6-BA1mg/L+Prat培养基诱导出茎叶体分化不明显的弱小芽体。