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条纹斑竹鲨,是一种比较有代表性的软骨鱼类,其肝脏比重占到内脏比重的3/4的。据研究报道,鲨鱼肝脏体内含有许多生物活性物质,包括了多种肝再生相关的刺激因子,但没有肝脏micro RNA的相关报道。由于micro RNA和基因组信息的缺乏,也影响了对鲨鱼肝再生调节的分子机制的深入研究。本研究构建了条纹斑竹鲨1/3肝切除模型,提取正常和再生3 h肝组织的RNA,应用Illumina测序平台对条纹斑竹鲨正常和再生肝脏进行micro RNA测序以及转录组测序,通过micro RNA测序,鉴定出670条micro RNAs(290条known micro RNAs和380条PC micro RNAs),这些micro RNA隶属于145个基因簇;通过转录组测序获得339998条Unigenes,其中有60047条Unigenes,能注释到基因信息。对测序结果进行初步分析,主要筛选肝再生过程中差异表达的基因和micro RNAs,进一步阐释肝再生的调控网络。主要筛选依据是正常和再生3 h肝组织中micro RNA和Unigene的Fold Change的比值,共筛选到119条差异表达的micro RNAs以及4754个差异表达的Unigenes。一方面以注释上基因信息的Unigenes作为靶基因库,利用mi Randa和Targetscan对119条差异micro RNAs进行靶基因预测,将这些候选靶基因进行GO功能以及KEGG富集分析,以P<0.01为阈值,筛选显著富集的GO注释以及信号通路,其中GO注释可映射到28个classes,其中包含了“cell division”、“cell cycle”以及“G2/M transition of mitotic cell cycle”;筛选出来8条显著富集的信号通路,其中包含了“Cell Cycle”和“JAK-STAT signaling pathway”。另一方面通过Real-Time PCR分析micro RNA以Unigene在正常和再生3 h肝组织中差异表达情况,验证了5条micro RNAs以及3条Unigenes在正常和再生3 h肝组织中具有2倍以上的差异。其中包括4条上调micro RNAs和1条下调micro RNA以及3条下调Unigenes(ICA、GSTP1和PDRX5)。然后通过靶基因预测软件分析验证具有差异表达的micro RNAs和Unigenes的靶向性,发现其中3条micro RNAs(PC-5p-13888168、xtr-mi R-34bL-1R+1和tni-mi R-144)和3条Unigenes(ICA、GSTP1和PDRX 5)具有靶向作用,进一步通过双荧光素酶报告法验证,将ICA、GSTP1和PDRX 5的3’UTR全长序列以突变及种子序列结合位点的3’UTR插入到psi CHECK2载体中,通过与对应的micro RNA mimics,转染共转染Huh7肝癌细胞,根据海肾荧光素酶的表达活性,找出PC-5p-13888168、xtr-mi R-34bL-1R+1和tni-mi R-144的靶基因。通过SPSS软件分析,结果显示xtr-mi R-34bL-1R+1显著下调GSTP1的3’UTR序列所在的海肾荧光素酶基因(P<0.01)。本研究获得了条纹斑竹鲨正常肝组织和再生3 h肝组织的micro RNA以及转录组测序数据此外,并通过实验方法验证了部分micro RNAs以Unigenes在正常和再生3 h肝组织中差异表达情况,以及上述差异表达的micro RNAs和Unigenes的靶向性,这对深入研究肝再生调控机理,具有积极的意义。