肝癌膜抗原HAb18G/CD147反义RNA表达载体的构建及其抑制肿瘤侵袭作用的初步研究

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HAb18G是本室制备、纯化的一株高特异性、高亲和力肝癌单抗HAb18的相应膜抗原。利用该单抗筛选人肝癌细胞cDNA文库,获得HAb18G长约1.7kb左右的cDNA序列。查询Genbank,其与人CD147分子开放读框相同。CD147分子,又名EMMPRIN,(细胞外基质金属蛋白酶诱导因子),其功能是刺激成纤维细胞(fb)产生基质金属蛋白酶(MMPs),而MMPs可降解细胞外基质,因而与肿瘤的转移与侵袭密切相关。本试验拟构建HAb18G/CD147分子反义载体,从分子水平抑制HAb18G/CD147分子的表达,从而抑制MMPs的表达,以分析其抑制肿瘤侵袭的作用。 本试验分三步:1.构建HAb18G/CD147反义表达载体。2.反义载体转染HHCC,筛选建株。3.观察其抑制肿瘤侵袭作用。双酶切已构建的克隆载体pbluescript sk(+)HAb18G(含HAb18GcDNA全长),将其反接到真核表达载体PCI-neo上,转染高表达HAb18G/CD147的肝癌细胞株HHCC中,G418筛选,有限稀释法筛出单个克隆,扩大培养,免疫组化SP法及流式细胞术鉴定,观察HHCC膜抗原HAb18G/CD147被封闭情况,并通过明胶酶谱法鉴定HAb18G/CD147表达被封闭后,Ⅳ型胶原酶分泌下降情况, 宝口旱区大学同士仆位傍大 用培养小室验证其抑制肿瘤侵袭力的作用。结果显示:载体构建成功, HAb SG几D147的表达被有效封闭,N型胶原酶分泌降低,肿瘤侵袭力下 降。结论:从分子水平抑制了HAbl8G/CD147 的表达;将其封闭后,其刺 激人成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶(WPS)的功能下降,从而间接抑制 了肝癌细胞的浸润转移。
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