结核分枝杆菌作为一种高效的病原菌，感染了世界约三分之一的人口，威胁着人类健康。尽管有链霉素、异烟肼、利福平以及减毒疫苗牛分枝杆菌BCG，但BCG在成年人中不能有效地控制肺结核，加上多重耐药菌的出现，使得结核病新药靶的研发迫在眉睫。　　 结核分枝杆菌的成功之处在于它们能躲避宿主体内免疫细胞的破坏，尤其是躲避巨噬细胞，原因主要在于结核分枝杆菌具有一个高度异常和典型的细胞壁，能保护它们抵抗不利的环境;此外，结核菌能分泌毒力蛋白，这些毒力蛋白能为结核菌争取更有利的生存环境。但是分泌的蛋白要穿过细胞壁这个疏水性屏障需要特异的分泌系统，而Ⅶ型分泌系统(T7S)已经被证实具有这一功能。研究表明ESX-1在结核分枝杆菌的毒力方面起着关键作用，已经证实ESX-1分泌系统中的ESAT-6和CFP-10是重要的抗原靶标，其分泌需借助ESX-1分泌相关蛋白(Esp)。由于EspA在致病性分枝杆菌中具有较高的保守性，因此被作为主要的药物靶标候选者。　　 通过文献调研发现，EspA通过影响结核分枝杆菌细胞壁完整性从而发挥毒力介导因子的作用。为研究EspA与结核菌形态建成和胁迫应答间的关系，我们从GenBank数据库中查得结核分枝杆菌H37RvRv3616c基因的核苷酸序列，并以结核分枝杆菌H37Rv全基因组为模板，体外扩增获得Rv3616c基因片段。通过TA克隆将PCR产物连接到pMD19-TSimpleVector，亚克隆至穿梭载体pNIT中，经菌落PCR以及序列测定证明重组质粒pNIT(myc)-Rv3616c构建成功。将重组质粒pNIT-Rv3616c电转至耻垢分枝杆菌(MycobacteriumSmegmatis)mc2155国际标准株中。在重组耻垢分枝杆菌培养液中加入诱导剂己内酰胺诱导目的蛋白EspA(Rv3616c)表达，并通过westernblot加以验证。我们检测在诱导条件下，与空载菌株相比，实验菌株的生长情况、滑动能力以及生物膜形成的差异，并对重组菌中24个碳原子以内的脂肪酸成分进行分析。此外检测了重组耻垢分枝杆菌对抗生素（链霉素、利福平、异烟肼、万古霉素）和SDS的耐受情况，分析EspA蛋白在分枝杆菌形态建成和胁迫应答中的作用。为进一步了解EspA的功能，通过Q-PCR检测了EspA与转录调控因子的相互关系。　　 本研究探讨了EspA对重组耻垢分枝杆菌形态建成和胁迫压力的影响。结果显示EspA的过表达对菌体脂肪酸结构修饰造成影响，使棕榈酸二碳位点发生甲基化，并使生物膜发生改变，菌体滑动能力明显减弱;而EspA的过表达可能通过影响细胞壁完整性，从而增强了菌体对细胞壁压力(SDS)的耐受性，但对4种抗结核药物的耐受性没有显著性影响;EspA过表达后对其转录调控因子具有负反馈调控作用。　　 本研究进一步证明了Rv3616c对结核分枝杆菌的形态建成和胁迫应答起着非常重要的作用，为进一步探讨EspA在分枝杆菌存活和毒力中的功能研究打下良好基础。